Plevral Dissemine Akciğer Kanserinin Fare Modelinin Oluşturulması

Özet

Kaynak: Yasui, H., et al. Plevral Yayılımın Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, immün yetmezliği olan bir farenin göğüs boşluğuna akciğer kanseri hücresi süspansiyonu enjekte ederek plevral yayılımın bir fare modelini oluşturmak için bir yöntem göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Plevral yayılım modelinin oluşturulması

1. Lusiferaz eksprese eden hedef hücreleri hazırlayın ve 100 μL fosfat tamponlu salin (PBS)
   içinde 1.0 ×^{10 6} hedef hücreyi askıya alın not: Akciğer kanseri ve MPM gibi intratorasik kanser hücreleri hedef hücre olarak uygundur. Lusiferaz eksprese eden hücreler, lusiferaz gen transfeksiyonu yoluyla hazırlandı ve > 10 hücre geçişinden sonra yüksek lusiferaz ekspresyonu doğrulandı. Hücreler %10 fetal sığır serum penisilin (100 IU/mL) ve streptomisin (100 mg/mL) ile takviye edilmiş bir ortamda kültürlendi. Hücre sayısı tümör büyüme hızına ve tedavi süresine göre ayarlandı (1.0. × 10 5-6.0 × 10⁶ hücre/vücut ağırlığı).
2. Tercih edilen vücut ağırlığı 19-21 g olan 8-12 haftalık dişi homozigot atimik çıplak fareler hazırlayın.
3. Prosedür sırasında izofluran ile fareleri uyuşturun (giriş:% 4-5, bakım% 2-3); reaksiyon olmadığını doğrulamak için kuyruğu cımbızla bastırın.
4. Polistiren köpüklü bir tıpa yapın ve akciğer hasarını önlemek için ucu 30 mm'de kalacak şekilde durdurucuyu 5 G iğneye takın. Pnömotoraksı önlemek için iğne ucunu temiz forseps ile veya %70 EtOH ile temizlenmiş sert bir cisme bastırarak bükün (Şekil 1).
   Dikkat: Kendini delmemeye dikkat et. İğneyi bükmek için forseps kullanın. İğneye takarken durdurucuyu tutmayın. Hücreleri şırıngaya doldurmadan önce durdurucuyu yapıştırmak daha güvenlidir.
5. Bir şırıngayı (1 mL) hedef hücrelerle doldurun ve bir tıpa ile 30G'lik bir iğne takın.
6. İşlemden önce hayvanın göğsünü% 70 EtOH ile dezenfekte edin.
7. İnterkostal boşluktan farenin göğsüne bir iğne delin. O sırada kaburgalara çarparken gösterilen direnç nedeniyle iğne ucu yukarı ve aşağı hareket etti. İnterkostal boşluktan geçtikten sonra, şırıngayı fareye bastırın ve 100 μL hedef hücre enjekte edin (Şekil 2).
   not: İğne göğüs boşluğuna düzgün bir şekilde girdiğinde fare derin nefes alır. İğne ucunun bükülmesi ile pnömotoraks ve akciğere uygun olmayan hücre enjeksiyonu önlenebilir.
   not: Kalp duvarı delinmesi riskini önlemek için sağ göğüs duvarı delinmesi önerilir.
8. Hücreleri göğüs boşluğu boyunca yaymak için fareyi 2-3 kez yuvarlayın.
9. Fareyi temiz ve sıcak bir kafese geri koyun ve ambulatuvar olana kadar izleyin. İşlemden sonra, fare anesteziden uyanacak ve normal davranacaktır.

Sonuçlar

Şekil 1: Hücre nakli için kolay el yapımı cihaz. Polistiren köpükten yapılmış durdurucuyu, uç 5 mm'de kalacak şekilde 30G iğneye takın. Pnömotoraksı önlemek için iğnenin ucu bükülmelidir.

Şekil 2: Hedef hücrelerin göğüs boşluğuna enjeksiyonu. Fareyi yana...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 mL şırınga	TERUMO	SS-01T	fareler deneyi için
30G iğne	Nipro (Nipro)	1907613	fareler deneyi için
BALB/cSlc-nu/nu	Japonya SLC
D-Luciferin (potasyum tuzu)	Cayman Kimya	14681	biyolüminesans görüntüleme ve DLIT için
İzofluran	Wako (Vahşi)	095-06573	fareler için anestezi
0.25w/v% Tripsin-1mmol/l EDTA 4Na Fenol Kırmızısı ile Çözelti	Wako (Vahşi)	209-016941	hücre kültürü için
L-glutamin ve Fenol Kırmızısı ile RPMI-1640	Wako (Vahşi)	189-02025	hücre kültürü için

Serisi