Kornea hasarını incelemek için otoimmün kuru göz sıçan modelinde floresein boyama

Özet

Kaynak: Hou Ahiua, et al. Göz Küresi Dokusunda Efektör Bellek T Hücrelerinde Artış Gösteren Kronik Otoimmün Kuru Göz Sıçan Modeli. J.Vis. Uzm. Öğr. (2017)

Bu video, bir sıçan modelinde otoimmün kuru göz hastalığının derecesini değerlendirmek için floresein boyası kullanılarak hasarlı korneanın boyanmasını göstermektedir. Lekeli kollajen liflerinin yeşil floresan lekeleri, kornea epitel hasarlı hücreleri gösterir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Kuru Göz Özelliklerinin Değerlendirilmesi

Floresein boyama ile kornea hasarını ölçün.

1. Sıçan korneasına 2 μL% 0.2 floresein ekleyin. Floresein boyasını göz yüzeyine yaymak için sıçan göz kapaklarını eldivenli bir parmakla 3 kez pasif olarak açın ve kapatın.
2. 1 dakika sonra, 3 mL'lik bir şırınga ile (herhangi bir iğne eki olmadan) 1 mL salin çekin, şırıngayı korneanın yaklaşık 2-3 mm önüne yerleştirin ve salini yavaşça göze itin.
3. Arka plan ışıkları kapalıyken bir oküler görüntüleme mikroskobunun kobalt mavisi filtresi (yani ~ 400 nm) altında görüntüler elde edin.
   not: Görüntüler daha sonra önceki yayınlardan değiştirilmiş bir derecelendirme sistemi ile analiz edildi. Görüntüler daha sonra yeşil noktaların sayısı, alanı ve yoğunluğu 0'dan 2'ye kadar öznel olarak derecelendirilerek analiz edildi, burada 0 yokluğunu, 1 50'den az noktasal lekelenmeyi ve 2 50'den fazla noktasal lekelenmeyi gösterir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
reaktif
Floresein sodyum çözeltisi	Bausch & Lomb Birleşik Krallık Limited Şirketi	Na
ekipman
Halka ışıklı aydınlatıcı ve kameralı stereo mikroskop	Carl Zeiss	Na

·