$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit veya EAE Modeli
- EAE modelinin indüksiyonu
- EAE indüksiyonu için 10 ila 13 haftalık dişi 129S4 / SvJae × C57BL / 6 fareler kullanın.
- Farelere, 400 μg Mycobacterium tuberculosis içeren 200 μl tam Freund adjuvanı (CFA) içinde emülsifiye edilmiş ensefalojenik MOG35 - 55 (miyelin oligodendrosit glikoprotein) peptidinin (200 μg) üst ve alt sırtına deri altı enjeksiyonu yapın.
not: Negatif, hastalığa neden olmayan sahte bir kontrol olarak, Mycobacterium tuberculosis içeren eksik Freund adjuvanı, aynı hacimde ve aynı yolla kullanılabilir.
- Daha sonra ve tekrar 24 saat sonra, farelere intraperitoneal bir boğmaca toksini enjeksiyonu yapın (toplam 0.2 μg, 200 μl fosfat tamponlu salin, PBS içinde seyreltilmiş). Hastalıklı ve sağlıklı hayvanları karşılaştırabilmek için tedavi edilmemiş fareleri kontrol grubu olarak kullanın.
not: EAE'yi 200 - 300 μg MOG35 - 55 peptid, CFA'da 300 - 500 μg Mycobacterium tuberculosis ve enjeksiyon başına 0.1 - 0.2 ml hacimde 0.2 - 0.3 μg boğmaca toksini ile indüklemek de mümkündür.
- Enjeksiyondan bir hafta sonra başlayarak, fareleri klinik semptomlar açısından günlük olarak inceleyin (bkz. adım 1.2.1)
not: Hastalığın başlangıç günü farklı deneylerde değişiklik gösterir, ancak laboratuvarımızdaki koşullar altında bu 11. gün civarındadır ve bu nedenle burada 14. gün hastalık başlangıcından 3 gün sonra olarak tanımlanır. Bu çalışmadaki tüm farelerde klinik semptomlar gelişti.
2. Farelerin puanlaması
- Klinik semptomları klinik skorlara göre şu şekilde sınıflandırın: 0) belirti yok, 0.5) kuyruğun distal felci, 1) kuyruğun tam felci, 1.5) gevşek kuyruk ve arka bacakların hafif zayıflığı, 2) gevşek kuyruk ve arka bacakların ciddi zayıflığı, 2.5) gevşek kuyruk ve bir arka bacağın felci, 3) topallayan kuyruk ve her iki arka bacağın felci, 3.5) Her iki arka bacakta felç ve bir ön bacakta zayıflık (bu puanı elde eden fareler, yerel etik kurallara uygun olarak ötenazi yapıldı).