Method Article

Antikorların Kompleman Aracılı Bakterisidal Aktivitesi için Bir Serum Bakterisidal Testi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Weerts, H. P., et al. Yüksek Verimli Shigella'ya Özgü Bakterisidal Test. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu video, serumda bulunan antikorların kompleman aracılı bakterisidal aktivitesini değerlendirmek için bir teknik göstermektedir. Bu yaklaşım, izole edilmiş serumu patojenik bakteriler ve eksojen kompleman proteinleri ile birleştirir. İnkübasyondan sonra, bakteriler bir agar plakası üzerinde büyütülür ve üretilen koloniler, serum bakterisidal titresini ölçmek için ölçülür.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Kompleman ve Hedef Bakterileri Hazırlayın

  1. Yavru tavşan tamamlayıcısı hazırlayın (BRC)
    NOT:     Tamamlayıcı lot seçimi için ayrıntılı kriterler burada bulunabilir: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
    1. Dondurulmuş BRC elde edin ve akan soğuk su ile çözdürün. BRC'yi tamamen çözülene kadar her ~ 10-20 dakikada bir fiziksel olarak karıştırın. BRC'yi tekrarlanan donma-çözülme döngülerine maruz bırakmayın.
    2. BRC çözülürken 1,5 mL, 5 mL veya 15 mL santrifüj tüplerini etiketleyin. Ön soğutmak için etiketli tüpleri buzun üzerine yerleştirin. Önceden soğutulmuş santrifüj tüplerine uygun ha....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Renk gelişiminden sonra LBA plakaları. Temsilci S. flexneri 3a bakteri mikro kolonileri gece boyunca uygun boyuta kadar büyümüştür. Overlay agar eklenmiş ve overlay agardaki TTC bileşiğinin indirgenmesiyle koloniler kırmızı bir renk geliştirmiştir.

figure-results-2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
jelatinSigmaG9391Tip B, toz, BioReagent, hücre kültürü için uygun
TTC (2,3,5-Trifeniltetrazolyum klorür)SigmaT8877≥98.0% (HPLC)
Sodyum azid (NaN3)SigmaS2002 Serisi≥99,5%
Yavru Tavşan TamamlayıcısıPel Dondurma31061-33-4 haftalık
Ca2 + / Mg2 + ile HBSSCanlandırıcı14065-56Fenol Kırmızısı Olmadan
LB Ağar (Lennox)SigmaL2897Toz mikrobiyal büyüme ortamı
Bacto AğarBd214010Toz, (C12H18O9)n
GliserolSigmaG5516Moleküler biyoloji için, %≥99
LB Suyu (Lennox)SigmaL3022Toz mikrobiyal büyüme ortamı
Kare Petri KabıSigmaZ617679-240 adet120 mm x 120 mm
Test PlakasıYardımcı yıldız3799Kapaklı 96 kuyulu U-alt plaka
NICE YazılımıBirmingham'daki Alabama Üniversitesiftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/
Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Serum Bactericidal AssayComplement Mediated Bactericidal ActivityAntibody LPS BindingSerial Dilution ProtocolBacterial Colony EnumerationTTC Overlay AgarHeat Inactivated ComplementMicrobiological IncubatorDigital Colony AnalysisGram Negative Bacteria

Related Articles