Bakteriyel Enfeksiyonun İn Vivo Takibi için Raportör Enzim Floresan Görüntüleme

Özet

Kaynak: Sharan, R., et al. Farelerde Mycobacterium tuberculosis'in Raportör Enzim Floresan ile Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonunun in vivo tespiti için raportör enzim floresan (REF) görüntülemeyi göstermektedir. Enfekte farelere intraperitoneal olarak REF görüntüleme için bir substrat enjekte edilir. Bakteriyel β-laktamaz enzimi tarafından hidrolize edildikten sonra, substrat floresan yayar ve bunun tespiti enfeksiyonun değerlendirilmesine yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Suşlar ve kültür koşulları

Not: Bu çalışmada M. tuberculosis suşu CDC1551 kullanılmıştır, ancak herhangi bir M. tuberculosis suşu aynı şekilde kullanılabilir.

1. Bakterileri M-OADC-TW'de (% 0.5 gliserol,% 10 katalaz içermeyen oleik asit dekstroz kompleksi ve% 0.05 Tween-80 ile desteklenmiş 7H9 suyu) 37 ° C'de 0.5 OD_600'e (~ 0.2 x 10⁷ koloni oluşturan birim veya CFU) büyütün.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
İzofluran	VETONE (VETONE)	501027
CNIR800	Özel sentezlenmiş
Fatal Plus çözümü	Vortech İlaç Ls, Ltd
7H9 Middlebrook suyu	Bd	271310
OADC Middlebrook zenginleştirme	Bd	212351
Sporcidin		YENİDEN 1284F
7H11 Middlebrook Ağar	Bd	212203
Madison Odası
IVIS Spektrumu	Perkin Elmer	124262
XGI-8-gaz Anestezi Sistemi	Perkin Elmer
Yaşayan Görüntüleme yazılımı	Perkin Elmer
Şeffaf burun konileri	Perkin Elmer
M. tuberculosis suşu CDC1551	ATCC (Uzay Servisi)
Dişi BALB/C fareleri, 5-7 hafta	Jackson Laboratuvarı