Kanser Hücrelerinin Nötrofil Hücre Dışı Tuzaklara Yapışmasını Tespit Etmek için İn Vitro Yapışma Testi

Özet

Najmeh, S., et al. Basitleştirilmiş İnsan Nötrofil Hücre Dışı Tuzakları (NET'ler) İzolasyonu ve İşlenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu videoda, kanser hücrelerinin nötrofil hücre dışı tuzaklara (NET'ler) yapışmasını tespit etmek için floresan mikroskobu kullanan bir testi gösteriyoruz. Test kuyucuklarında, NET'lere yapışan floresan işaretli kanser hücrelerinin sayısında kayda değer bir artış olurken, DNaz ile muamele edilen kuyucuklar, NET'lere kanser hücresi yapışmasında azalma sergilemektedir.

Protokol

1. NET-Kanser Hücresi Statik Adezyon Testi

1. 96 oyuklu düz tabanlı bir plakaya kuyu başına önceden elde edilen NET stoğundan 100 μl ekleyin ve karanlıkta 4 °C'de kuyuların O/N kaplamasına izin verin.
2. 12 ila 20 saat sonra, mikroskop altında kuyucukların dibinde tek tip bir hücresiz NET tek tabakasının oluşumunu doğrulayın (Şekil 1). Bu noktada, alttaki NET tek tabakasını bozmamaya dikkat ederek, yapışmayan tüm malzemeleri kuyulardan nazikçe aspire edin.
3. Her oyuğa 100 μl% 1 Sığır Serum Albümini (BSA) bloke edici çözelti ekleyin ve RT'de 1 saat bekletin.
4. A549 kanser hücrelerini 2 ml% 0.25 Tripsin ç....

Sonuçlar

Şekil 1. NET Tek Katmanlı. NET'lerle kaplanmış 96 oyuklu plaka kuyularının ışık mikroskobu görüntüleri, (A) kuyu boyunca tek tip bir NET tek tabakası gösterirken, (B) kuyunun kesintiye uğramış bir NET tabakası ile yetersiz kaplanmasını göstermektedir. Ölçek çubukları 40 μm'yi temsil eder.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin (PBS), Modifiye, kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içermez	avrupa bizonu	311-425-CL
RPMI-1640 L-glutamin içeren Orta	avrupa bizonu	350-000-CL	% 3 RPMI çözeltisi, RPMI'nin% 3 Fetal Sığır serumu ile takviye edilmesiyle yapılır
BD Pharm Lyse Lysing tamponu	BD Biyolojik Bilimler	555899
DNAse1	Roche	11284932001
F12 DMEM (Türkçe	avrupa bizonu	319-075-CL
Fetal Sığır Serumu (FBS)	avrupa bizonu	080-150
Penisilin / Streptomisin	Gibco (Gibco)	15140-122
CFSE (Mali İşler T	Canlandırıcı	C1157
% 0.25 Tripsin-EDTA	Gibco (Gibco)	25200-056

) arası Serisi