Method Article

Vitronektinin Bakteri Yüzeylerine Bağlanmasının Flow Sitometri Kullanılarak Tespiti

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Singh, B. ve ark., Vitronektinin Bakteriyel Yapışma ve Serum Direncindeki Rolünü İncelemek İçin Deneyler.J. Vis. Uzm.(2018)

Bu video, vitronektinin bakteriyel yüzey proteinleri ile etkileşiminin tespitini göstermektedir. Akış sitometrisi analizi, vitronektine bağlı floresan etiketli antikorların floresan sinyalini ölçer ve bakteri yüzeyindeki varlığını doğrular. Bu teknik, konak-patojen etkileşimleri ve potansiyel bakteriyel enfeksiyon tedavileri hakkında bilgi sağlar.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Vitronektin, Vn'nin Bakteriyel Yüzey Protein-Ligandı Olarak Analizi

  1. Akış sitometrisi
    kullanılarak bakteri yüzeyinde Vn bağlanmasının tespiti     not: Akış sitometrisinde, pozitif olayları geçmek için yan saçılma ve ileri saçılma kullandık. Vn, Haemophilus influenzae tip f ile etkileşimleri incelemek için Hif klinik izolatları (n=10) negatif kontrol olarak E. coli BL21 (DE3) ile birlikte seçildi (Şekil 1A).
    1. Kültür: 10 μg/mL nikotinamid, adenin, dinükleotid (NAD) ve hemin ile desteklenmiş beyin-kalp infüzyonu (BHI) ortamında 200 rpm'de çalkalanarak Hif kli....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Haemophilus influenzae serotip f, yüzey eksprese edilen PH yoluyla Vn'yi bağlar.(A) Vn'nin Hif klinik izolatlarının hücrelerine bağlandığını gösteren akış sitometrisi sonuçları. Her klinik izolat (5 x 10,6 CFU) 250 nM insan Vn ile inkübe edildi. Bağlı ligand, koyun anti-Vn pAb'leri ve FITC konjuge eşek anti-koyun sekonder antikorları kulla.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
5 mL polistiren yuvarlak tabanlı tüp BD Şahin60819-13812 × 75 mm stili
Sığır Serum Albüminleri (BSA)Sigma-AldrichA2058Hücre kültürü için uygun
Akış sitometresi BD Biyolojik Bilimler651154Araştırma uygulamaları için hücre analizi notu
İnsan plazmasından vitronektin (Vn)Sigma-AldrichV8379-50UGHücre kültürü sınıfı
E. coli konakçısı (E. coli BL21)Yenilikçi69450-3Protein ekspresyon konağı
FITC konjuge eşek anti-koyun antikorları AbD SerotecSTAR88FPoliklonal
Koyun anti-insan Vn antikorlarıAbD SerotecAHP396Poliklonal
Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Vitronectin BindingFlow CytometryBacterial SurfaceAnti vitronectin AntibodiesFluorescence SignalWild type BacteriaMutant StrainProtein HSecondary AntibodiesCentrifugation Wash

Related Articles