Periferik Kan Alma ve Plazma İzolasyonu için Bir Fare Kuyruğu Snip Prosedürü

Özet

Kaynak: Coats, J. S. et al., Sitokin Transdüksiyonlu Stromal Hücre Hattı ile Enjeksiyon Yoluyla Hasta Kaynaklı Ksenogreftlerde Eksojen Sitokin Ekspresyonu. (2017)

Bu videoda, periferik kanı toplamak için bir fare modelinde kuyruk kesme prosedürünü gösteriyoruz. Toplanan kan daha sonra daha ileri deneyler için kullanılabilecek ayrı plazma için santrifüjlemeye tabi tutulur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Farelerde Ekzojen İnsan Sitokini için Seri Kan Alma ve Plazma İzleme

1. Kuyruk kesme ile kan alma
   1. Biyogüvenlik başlığını dezenfekte edin ve prosedür için fare sınırlayıcıyı, makası ve diğer aletleri/malzemeleri monte edin.
   2. Fareyi bir sınırlayıcıya yerleştirin ve fare hareketini en aza indirmek için tüpü sabitleyin.
   3. Kuyruğu ve cerrahi makası izopropil alkolle dezenfekte edin. Kuyruğa topikal anestezik krem sürün.
   4. Çok keskin cerrahi makas kullanarak, farenin kuyruğunun ucunun yaklaşık 0,5 - 1 mm'sini kesin. Heparinize kılcal tüpler kullanarak yaklaşık 80 μL periferik kan toplayın.
      not: Bu yöntemle altı defadan fazla kan alınacaksa, kuyruk çıkarma, çıkarılan kuyruk miktarına göre muhafazakar olmalıdır. Keskin nişancılar kuyrukta ilerledikçe çap artar, daha hızlı kanar ve iyileşme daha uzun sürer.

2. Plazma ayırma

1. Kanı bir ampul şırıngası kullanarak (kılcal tüplerden çıkarmak için) etiketli bir K₂EDTA mikrotainer tüpüne aktarın; pıhtılaşmayı önlemek için 20 kez ters çevirin.
   not: Tipik olarak, kuyruk kıstırmasından kan pıhtılaşması hızlıdır. Bununla birlikte, kanama ~ 2 dakikadan daha uzun sürerse, pıhtılaşmaya yardımcı olması için tipik bir kalem / toz kullanın.
2. Kan alma tüplerini üreticinin talimatına göre santrifüjleyin ve plazmayı daha fazla analiz için hazır olana kadar saklamak için (-20 ° C) ayırın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kanüllü Hayvan İmplante Edilebilir Nano Transponder	Truva	Kimlik-100B(1.25)
EMLA lidokain anestezik krem (hayvan bakım tesisinden önceden temin edilir)	Zorunlu Yazı	Zorunlu Yazı
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 İnsülin Şırıngası 28G1/2	Bd	#329461
K2EDTA'lı BD Mikro Tutucu Tüpler	Bd	#365974
merkezkaç	Beckman Coulter'ın fotoğrafı.	Alegra X-15R
FisherBrand Kılcal Damar Tüpleri (Heparinize Edilmiş)	Balıkçı Bilimsel	22-260-950
Hemositometre	balıkçı	02-671-6
MACSQuant Analizörü 10	Miltenyi Biyotec	130-096-343
Fare Pasta Kafesi	Braintree Bilimsel A.Ş.	MPC-1
Fare Kuyruğu Aydınlatıcı Süzgeç	Braintree Bilimsel A.Ş.	MTI Cinsel Yolla Bulaşan Hastalıklar
Tabanca Kabzası İmplanter	Truva	IM-300(1.25)
"NSG fareleri" BAŞINI SALLADI. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, erkek veya kadın, 6 – 8 haftalık	JAX Fareler	# 005557

Serisi yaş