Lenfosit Alt Tiplerini Karakterize Etmek için Üç Boyutlu Kantitatif Faz Görüntüleme

Abstract

Kaynak: Yoon, J. et al. Üç Boyutlu Kantitatif Faz Görüntüleme ve Makine Öğrenimi Kullanarak Lenfosit Alt Tiplerinin Etiketsiz Tanımlanması. J. Vis. Uzm.(2018)

Bu video, 3D kantitatif faz görüntüleme yoluyla lenfosit morfolojisi ve biyokimyasının etiketsiz tanımlamasını gösterir. Bu teknik, lenfositlerin kapsamlı bir analizine, etiketleme prosedürlerine gerek kalmadan iç yapılarının ve özelliklerinin ortaya çıkarılmasına olanak tanır.

Protocol

1. Flow Sitometrisi ve Lenfosit Alt Tiplerinin Sınıflandırılması

NOT: Lenfositleri hücre tipine göre sıralamak, denetimli öğrenmede bir hücre tipi sınıflandırıcısını eğitmek ve test etmek için temel gerçek (yani doğru) hücre tipi etiketlerini oluşturmak için gereklidir. Altın standart bir yöntem olan akım sitometrisi, lenfositleri tanımlamak ve ayırmak için kullanılır.

1. 100 μL taze RPMI-1640 ortamında [% 10 FBS, 0.1 μg CD3e (17A2), CD8a (53-6.7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-6B2) ve NK1.1 (PK136) ile yüzey işaretleyici boyama antikorlarının bir karışımını yapın ve 0.25 μg CD4 (GK1.5) antikorları hedef B,....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Akış sitometrisi	BD Biyolojik Bilimler	Aria II veya III
Görüntüleme odası	Tomocube, Inc.	TomoDish (TomoDish)
Holotomografi	Tomocube, Inc	HT-1H
Holotomografi görüntüleme yazılımı	Tomocube, Inc.	TomoStudio (TomoStudio)
Görüntü işleme yazılımı	Matematik Çalışmaları	Matlab R2017b
Falcon konik santrifüj tüpü	ThermoFisher Bilimsel	14-959-53A	15 mL
Fosfat tamponlu tuzlu su	Sigma-Aldrich	806544-500ML
Amonyum-klorür-potasyum parçalama tamponu	ThermoFisher Bilimsel	A1049201
RPMI-1640 orta	Sigma-Aldrich	R8758 Serisi
Fetal sığır serumu	ThermoFisher Bilimsel	10438018