İmmün Ortaya Çıkarma Üzerine Pirinç Dokularında Reaktif Oksijen Türleri Üretimini Tespit Etmek İçin Bir Test

Özet

Kaynak: Wang, Y., et al. Kemilüminesans Testi ile Pirinçte İmmün Yanıtta Reaktif Oksijen Türleri Üretiminin Gerçek Zamanlı Tespiti. J. Vis. Uzm. (2022).

Bu video, patojenle ilişkili moleküler model (PAMP) ortaya çıkarılması üzerine pirinç dokularında reaktif oksijen türleri (ROS) üretiminin gerçek zamanlı tespiti için bir testi göstermektedir. Kesilen kılıf segmentleri ve yaprak diskleri, bir PAMP olarak işlev gören bakteriyel flagella türevi bir peptit işlemine maruz bırakılır. Peptitin bitki hücreleri üzerindeki örüntü tanıma reseptörleri (PRR'ler) yoluyla tanınması üzerine, bir kemilüminesans testi ile tespit edilen hızlı ve geçici bir ROS üretimi meydana gelir.

Protokol

NOT: Protokol farklı bitki dokularına uygulanabilir. Bu protokolde PAMP ortaya çıktıktan sonra ROS tespiti için pirinç kılıfı ve yaprak diskleri kullanılmıştır. Farklılıklar esas olarak örnekleme yöntemine bağlı olarak ortaya çıktığından, aşağıda yalnızca ortak prosedürler açıklanmıştır ve gerektiğinde belirli adımlara değinilmiştir.

1. Doku hazırlama ve ön işlem

1. Pirinç kılıfı
   1. ROS testinden 1 gün önce ön işlem için 10 günlük pirinç fidelerinin kılıfını keskin bir tıraş bıçağı veya cerrahi bıçakla 3 mm'lik segmentler halinde kesin (Şekil 1B).
   2. Karanlıkta 25 ....

Sonuçlar

Şekil 1: Kılıf örneklemesi için pirinç fidelerinin büyüme durumu ve aşamaları ve tahlilde kullanılan pirinç kılıfı ve pirinç yapraklarının parçaları. (A) 10 gün boyunca steril koşullar altında 1/2 MS ortamında yetiştirilen pirinç fidelerinden ROS testi için numune alınabilir. Sterilize edilmiş pirinç tohumları 1/2 MS ortamında kültürlendi ve 8.5 cm çapında ve 15 cm yüksekliğinde şeffa.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
96 oyuklu mikrotitre plakası	WHB (İngilizce)	WHB-96-01 Serisi
flg22	Sangon Biyoteknoloji	P20973 Serisi	PAMP (KÖPŞ
5. Nesil	BioTek		yazılım
L-012	FUJIFILM FİLMİ	120-04891	8-amino-5-kloro-7-fenil-2,3-dihidropirido [3,4-d] piridazin-1,4-dion, CAS #: 143556-24-5
Mikroplaka okuyucu	BioTek	Sinerji 2
Yaban turpundan peroksidaz (HRP)	Sigma	P8375 Serisi
Örnekleyici	Milteks	15110-40
Tris	Sangon Biyoteknoloji	A610195

) Teknolojisi Serisi Teknolojisi arası