Virüsler Arasındaki Antijenik İlişkinin Görüntü Tabanlı Mikronötralizasyon Testi Kullanılarak Analiz Edilmesi

Abstract

Kaynak: Lin, Y., et al. Kantitatif Mikro-nötralizasyon Testinin Optimizasyonu. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, influenza A ve B virüsleri arasındaki antijenik ilişkileri analiz etmek için görüntüleme tabanlı mikro nötralizasyon testini göstermektedir. Viral enfeksiyonu önlemede antikorların veya diğer tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için nicel ve görsel bir yol sağlar.

Protocol

>1. Virüs Titrasyonu

>NOT: Virüslerin sayısına ve kopyaların sayısına bağlı olarak, aşağıdaki esnekliklerle bir kuyu plakası kurulabilir: (1) Viral seyreltme, satırlar veya sütunlar boyunca düzenlenebilir (Şekil 1). Her virüs ayrı bir satır/sütun işgal etmelidir. (2) Viral seyreltme artışı esnektir, ancak sol üst köşedeki en yüksek viral konsantrasyonla başlamalıdır. (3) Mükerrer sayısında herhangi bir kısıtlama yoktur.

1. Yeterli MDCK hücrelerini veya MDCK-SIAT hücrelerini8 96 oyuklu plakalara (200 μl/oyuk) ayırın. Hücreleri 37 ° C'de% 5 CO₂ ile 2 veya 3 gün boyunca inküb....

Results

Şekil 1: Bir virüs titrasyon deneyinde kuyu plakası kurulumu örneği. Test virüsleri ayrı satırlara (A'dan H'ye) atanır. Sütunlar farklı viral dilüsyonlar (1 ila 12) için tasarlanmıştır. Her viral seyreltme için kopya olarak iki sütun kullanıldı. Ölçek çubuğu = 10 mm.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
VGM (Radyo Frekansı	Sigma	D6429, P0781	500 ml DMEM+5 ml Kalem/Strepb
PBS A			Doğa pH Fosfat tamponlu salin: NaCl 10 g, KCl 0.25 g, Na2HPO4 1.437 g, KH2PO4 0.25 g ve Dist. Su 1 L
Avi hücresi	Myk	RC-581F	100 ml damıtılmış suda 2,4 g, 1 saat boyunca manyetik bir karıştırıcı üzerinde çalkalama ile çözülür. Otoklavlama ile sterilize edin
2 adet DMEM	Gibco (Gibco)	21935-028
Tripsin	Sigma	T1426
Kaplama (10 ml / plaka):			5 ml 2x DMEM, Tripsin 2 μg/ml nihai konsantrasyon, Avicell 5 ml
Triton X- 100 e	Sigma	T8787	Geçirgenlik tamponu: PBS A'da %0,2 (h/h)
Ara 80	Sigma	P5188 Serisi	Yıkama Tamponu: PBS A'da %0,05 Tween 80 (v/v)
At serumu	PAA Laboratuvarları Ltd	B15-021	ELISA Tamponu: PBS A'da %10 (v/v) + %0.1 Tween 80
İnfluenza tip A'ya karşı fare MAb	Biyorad	MCA 400	1. Antikor: ELISA Tamponunda 1:1.000
Keçi anti-fare IgG (H + L) HRP eşleniği	Biyorad	172-1011	2. Antikor: ELISA Tamponunda 1:1.000
Gerçek Blu peroksidaz substratı	KPL (Türkçe)	50-78-02	Yüzey: Gerçek mavi +%0.03 H2O2 g (%30'luk çözeltinin 1:1.000'i)
96 kuyulu düz tabanlı mikrotitre plakaları	Yardımcı yıldız	3596
8 kanallı çok duvarlı plaka yıkayıcı ve manifoldu	Sigma	M2656
Mükemmellik Plaka Tarayıcı	Epson'un	V750 Pro	Görüntüleme yazılımı http://www.epson.com/cgi-bin/ Store/support/supDetail.jsp? oid=66134&infoType=Downloads adresinden ücretsiz olarak indirilebilir.
Yazılım işletim ortamı: LabVIEW	Ulusal Enstrümanlar Şirketi	NI Vision builder ile pencere tabanlı	Sürüm: LabVIEW2012 veya üzeri