Bakteriyosin Üreten Murin Fekal Bakteri İzolatlarının Antimikrobiyal Potansiyelinin Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Bäuerl, C., et al. Farelerin bağırsak mikrobiyotası üzerindeki bakteriyosin etkilerini değerlendirmek için bir yöntem. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, fare dışkı maddesinden türetilen bakteriyosin üreten laktik asit bakterilerinin tespitini göstermektedir. Tahlil, bakteriyosinin belirli bakteri suşları üzerindeki antimikrobiyal aktivitesini belirler.

Protokol

1. LAB Sayımı ve Bakteriyosin Aktivitesi

1. 1.5 mL'lik bir tüpte her numunenin bir dışkı peletini tartın ve% 10 (a / h) bir çözelti elde etmek için yeterli hacimde buz gibi% 0.9 NaCl ekleyin. Dışkı süspansiyonunu homojenize etmek için 1,5 mL'lik tüpler için steril mikro havaneli kullanın ve buz gibi soğukta %0,9 NaCl'de on kat seri seyreltmeler hazırlayın.
2. LAB hücrelerinin toplam sayısını sayın.
   1. Seyreltilmiş hücreleri (100 μL) 4 mL önceden ısıtılmış Man Rogosa Sharpe (MRS) yumuşak agarına (50 °C,% 0.8 agar) aktarın. Hücreleri katı bir MRS agar plakasına (% 1.5 agar) dökmeden önce girdaplama ile karıştırın.
   2. Hücre büyümesi ve koloni oluşumu için hücreleri 30 ° C'de 20 - 24 saat inkübe etmeden önce steril başlıkta kapağı 5 - 10 dakika çıkararak plakayı kurutun.
3. Bakteriyosin üreten hücreleri sayın.
   1. Bakteriyosin üreticisinin seyreltilmiş hücrelerini (100 μL) 4 mL önceden ısıtılmış MRS yumuşak agar'a (50 °C,% 0.8 agar) aktarın, girdaplama ile karıştırın ve hücreleri bir MRS agar plakasına (% 1.5 agar) dökün; bu katman ilk katman olarak adlandırılır.
   2. Tüm hücreleri yumuşak agar içine gömmek için ilk katmana 4 mL hücresiz MRS yumuşak agar (% 0.8 agar) aktarın.
      not: Bu katman, hücrelerin agar plakalarının yüzeyinde koloniler halinde büyümesini önlemek içindir. Yüzeyde büyüyen hücreler, indikatör hücreler üste dökülürken (adım 4.3.4) kolayca yer değiştirir ve bu nedenle sonuçların yorumlanmasını zorlaştırır. Bu katman ikinci katman olarak adlandırılır.
   3. Hücre büyümesi ve koloni oluşumu için 30 ° C'de 20 - 24 saat inkübe etmeden önce steril başlıkta kapağı 5 - 10 dakika çıkararak plakayı kurutun.
   4. Bakteriyosin üreten kolonileri tanımlamak için, 40 μL önceden ısıtılmış yumuşak agar ile uygun bir indikatör suşun gece boyunca kültürünü karıştırın. Karışımı tabağa dökün; Bu katman üçüncü katman olarak adlandırılır.
   5. Hücre büyümesi ve koloni oluşumu için 30 °C'de 20 - 24 saat inkübe etmeden önce steril davlumbazda kapağı 5 - 10 dakika çıkararak plakayı kurutun.
      not: Bakteriyosin üreten kolonilerin etrafında açık (inhibisyon) bölgeler bulunur (Şekil 1).

Sonuçlar

Şekil 1: Üç Katmanlı Protokol ile Dışkıdan Geri Kazanılan LAB'de Bakteriyosin Üretiminin Tespiti (prosedürde açıklandığı gibi)

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Plastik Petri kabı	Termo Bilimsel	101VR20
Beyin-Kalp-İnfüzyon suyu	Conda (Devam)	1400
Avrupa Bakteriyolojik Agar	Pronadisa Çiçeği	1800
Agaroz D1 Düşük EEO	Pronadisa Çiçeği	8010
1x TAE tamponu	Termo Bilimsel	15558042
BAYAN suyu	Difco Bilişim	288130
PBS tabletleri	Sigma	P4417-100SEKME
ölçeklemek	Mettler Toledo	PB602-S

adet yılı Teknolojileri Serisi