Method Article

Fare Testislerinde Proteine Bağlı RNA'nın Verimli Tanımlanması için Gelişmiş Bir Çapraz Bağlama İmmünopresipitasyon Yöntemi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Xu, Q., et al. Fare Testinde Proteine Bağlı RNA'nın Etkili Tanımlanması için Gelişmiş Çapraz Bağlama İmmünopresipitasyon (eCLIP) Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, fare testisindeki RNA bağlayıcı proteinleri tanımlamak için geliştirilmiş çapraz bağlama immünopresipitasyon (eCLIP) yöntemini göstermektedir. eCLIP, RNA bağlayıcı proteinlerin (RBP'ler) hedef RNA'ları ile etkileşime girdiği bağlanma bölgelerinin hassas bir şekilde tanımlanmasını sağlar.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Doku Toplama ve UV Çapraz Bağlama

  1. 2 yetişkin fareyi karbondioksit (CO2) kullanarak 1-2 dakika veya solunum durana kadar ötenazi yapın. Ardından, her farede servikal çıkık gerçekleştirin.
  2. Her immünopresipitasyon deneyi için uygun yaştaki farelerden (bu çalışmada bir yetişkin testis) yaklaşık 100 mg testis toplayın ve dokuları buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin (PBS) içine yerleştirin.
  3. Tunika albuginea'yı bir çift inc....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Antikor
Anti-fare MOV10 antikoruProteintech, Çin10370-1-AP
Anti-fare MOV10L1 antikoruZheng ve ark.20109poliklonal antiserumlar UP2175
HRP Keçi Anti-Tavşan IgGABklonalAS014
Tavşan IgGBeyotime, ÇinA7016
ekipmanEppendorf, Hamburg, Almanya5242R
Dijital sonifierBRANSON, AMERİKA BİRLAŞTIRMABBV12081048A
DynaMag-2 MıknatısInvitrogen, Amerika Birleşik Devletleri12321D
UV ışığı çapraz bağlayıcıUVP, Amerika Birleşik DevletleriCL-1000
Malzeme
TüpCorning, Amerika Birleşik Devletleri430791
Mikrotüp tüplerAXYGEN , AMERİKA BİRLEŞİK DEVLETLERİMCT-150-C1,5 mL
Reaktif
Asit fenol/kloroform/izoamil alkolSolarbio, ÇinP1011 Serisi25:24:01
AffinityScript EnzimiAgilent, Amerika Birleşik Devletleri600107
RNaz IInvitrogen, Amerika Birleşik DevletleriAM2295
RNaz İnhibitörüPromega, Amerika Birleşik DevletleriN251B
RQ1 DNazPromega, Amerika Birleşik DevletleriM610A Serisi
Numune Azaltıcı AjanInvitrogen, Amerika Birleşik DevletleriNP0009
SDS ÇözümüInvitrogen, Amerika Birleşik Devletleri15553027%10
Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Crosslinking ImmunoprecipitationRNA Binding ProteinMouse TestisUV CrosslinkingMagnetic Bead ImmunoprecipitationRNA Protein ComplexProteinase InhibitorRNase DigestionSonication LysateHigh Salt Wash

Related Articles