Enfekte farelerde drenaj lenf düğümlerine cilt dendritik hücre göçünü izlemek için CFSE tabanlı bir test

Özet

Kaynak: Bollampalli, V. P., et al. Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin ile Enfeksiyon Sırasında Murin Deri Dendritik Hücrelerinin Drenaj Lenf Nodlarına Göçünü İncelemek İçin CFSE Tabanlı Bir Test. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, farelerde Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin BCG ile ayak tabanı enfeksiyonunu takiben dendritik hücre göçünü izlemek için bir testi göstermektedir. Bakteriyel enfeksiyon üzerine, aktive edilmiş cilt DC hücreleri, hücre geçirgen bir karboksifloresein diasetat süksinimidil ester (CFSE) boyası ile etiketlenir. Popliteal drenaj lenf noduna DC migrasyonu için uygun bir aralıktan sonra, nod hücreleri izole edilir ve DC'ye özgü yüzey belirteçleri için immün boyamaya tabi tutulur. Taşınan DC'lerin tanımlanması akış sitometrisi kullanılarak gerçekleştirilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. CFSE Stoklarının Hazırlanması ve Depolama

1. Dimetil sülfoksit içinde 5 mM'lik bir 5 mM 5 ve 6 karboksifloresein diasetat süksinimidil ester (CFSE) stoğu hazırlayın. Girdap. 100 μl'lik alikotları steril, 0,5 ml'lik vidalı kapaklı mikrotüplere dağıtın. Alikotları -80 °C'de saklayın.

2. Fareler

1. 8 ila 12 haftalık yaşları arasında akraba evli erkek veya dişi fareler kullanın. Cinsiyet ve yaş uyumlu hayvanlar ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
İzofluran	Baxter	1001936060
5- ve 6-karboksifloresein diasetat süksinimidil ester (CFSE)	Canlandırıcı	C1157
Dimetil sülfoksit (DMSO)	Sigma	D2650
Fetal sığır serumu (FBS)	Sigma	F7524
Bacille Calmette-Guérin (BCG)			Strain Pasteur, evde
Tripan mavisi çözeltisi	Sigma	T8154
Edta			Evde
Sodyum azid	Sigma	S2002 Serisi
Pbs			Evde
Filtrelenmiş su			Evde
BD Plastipak 3 ml şırınga	BD Medikal Cerrahi Sistemler	309658	Alternatif: 5 ml şırınga
6 kuyulu plakalar	TPP (Cesaret Partisi	92006
15 ml santrifüj tüpleri	TPP (Cesaret Partisi	91015	Polipropilen
5 ml yuvarlak tabanlı tüpler	BD Şahin	3272948	Polistiren
Univentor 400 anestezi ünitesi	Üniventör	8323001
Monojet 3/10ml şırınga	Medicarrier	8881511144	29 G x 1/2 inç
Steril filtre ünitesi	TPP (Cesaret Partisi	99500	PES zarı
EPPI-Pistill homojenizatör	Schuett biyoteknoloji	3.200 512	Polipropilen
Allegra X-30R santrifüj	Beckman Coulter'ın fotoğrafı.	B01145
Bürker sayma odası	VWR (VWR)	631-0920
0,5 ml vidalı kapaklı mikrotüp	Sarstedt	72,73	Polipropilen
1.5 ml Eppendorf mikrosantrifüj tüpü	VWR (VWR)	700-5239	Polipropilen
70 mikron hücreli süzgeçler	VWR (VWR)	734-0003
FlowJo hücre analiz yazılımı	Ağaç Yıldızı
antikor	Klon	şirket
Antikor
MHC-II I-A/I-E	M5/114.15.2	BD Biyolojik Bilimler
CD11b	M1/70	BD Biyolojik Bilimler
CD11c (İngilizce)	HL3	BD Biyolojik Bilimler
CD16/CD32 (Fc bloğu)	2.4G2	BD Biyolojik Bilimler
CD326/EpCAM	G8.8	Biyoefsane
CD103	2.00E+07	Biyoefsane
CD80	16-10A1	Biyoefsane
CD86	GL-1	Biyoefsane

Serisi Serisi Serisi Serisi Haber Bülteni adet Serisi Belediyesi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi arası Serisi Serisi