Primer İnsan Bağışıklık Hücrelerinin Antifungal Aktivitesinin Gerçek Zamanlı Değerlendirmesi

Özet

Kaynak: Brunel, S. F. et al., A. fumigatus'a Yanıt Olarak İnsan Primer Nötrofilleri ve Monositleri Tarafından Antifungal Aktivitenin Canlı Görüntülenmesi.J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, floresan Aspergillus reporter conidia kullanılarak insan nötrofillerinde antifungal aktivitenin analizi için canlı hücre görüntülemeyi göstermektedir. Başlangıçta, nötrofiller içinde hem kırmızı hem de macenta floresan tespit edilirken, kırmızı floresan zamanla azalır, bu da conidia'nın bozulmasını gösterir ve nötrofillerin antifungal aktivitesini doğrular.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. A. fumigatus Kültür ve Koşulları

1. Glikoz minimal agar ortamını açıklandığı gibi hazırlayın.
   1. 1 M sodyum hidroksit (NaOH) kullanarak ortamı pH 6.5'e ayarlayın ve 120 °C'de 20 dakika boyunca otoklav yapın.
   2. 65 °C'ye kadar soğumaya bırakın.
   3. Steril bir akış başlığında çalışarak, 30 mL soğutulmuş ortamı bir T75 şişesine dökün ve bir agar eğimi oluşturmak iç....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Gliserol	Sigma	G6279	http://www.sigmaaldrich.com
T75 şişesi	Greiner Bio-Bir	658 175	http://www.greinerbioone.com/
Pbs	Gibco (Gibco)	20012-019	https://www.thermofisher.com/
Ara-80	Balıkçı Bilimsel	10592955	https://nl.fishersci.com/
40 μm filtre	Thermo Fisher Bilimsel	22363547	https://www.thermofisher.com/
15 ml Falcon tüpü	Greiner Bio-Bir	188 261	http://www.greinerbioone.com/
50 ml Şahin tüpü	Greiner Bio-Bir	227 261	http://www.greinerbioone.com/
MilliQ	Kırlangıç	QGARD00R1	Nanosaf su da benzer şekilde çalışır. http://www.merckmillipore.com/
Biotin	Moleküler Problar	B-6352	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/molecular-probes.html
DMSO (Türkçe)	Sigma	D5879	http://www.sigmaaldrich.com
Streptavidin-AF633	Moleküler Problar	S-21375 Serisi	AF633, şu ana kadar test edilen ve fagozomlarda görünür kalan tek florofordur. https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/molecular-probes.html
EDTA'lı kan tüpleri	Greiner Bio-Bir	455036	Pıhtılaşma önleyici bir ajan içeren herhangi bir kan tüpü çalışmalıdır. http://www.greinerbioone.com/en/start/
Ficoll-Paque Artı	GE Sağlık	17-1440-03	http://www3.gehealthcare.com/
Tripan mavisi	Thermo Fisher Bilimsel	SV3008401	https://www.thermofisher.com/
HBSS (Türkçe)	Gibco (Gibco)	14170112	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/gibco.html
CD14 mikro boncuklar	Myltenyi Biyotec	130-050-201	Diğer monosit izolasyon yöntemleri de kullanılabilir, biz bu yöntemi emek yoğun olmadan tutarlı bir yüksek monosit saflığı verdiği için tercih ediyoruz. http://www.miltenyibiotec.com/en/
MS Sütunları	Myltenyi Biyotec	130-042-201	CD14 mikro boncuklarındaki yoruma bakın. http://www.miltenyibiotec.com/en/
RPMI + Glutamax	Gibco (Gibco)	72400-021	https://www.thermofisher.com/uk/en/home/brands/gibco.html
CO2'den bağımsız ortam	Thermo Fisher Bilimsel	18045054	Görüntüleme sırasında yeterli CO2 değişimi yoksa gereklidir. https://www.thermofisher.com/uk/en/home
μ kaydıraklı 8 kuyulu cam alt	İbidi	80827	Bu, kullandığımız görüntüleme kabıdır, ancak uygun boyuttaki herhangi bir cam görüntüleme kabı çalışmalıdır. http://ibidi.com/
UltraVIEW VoX 3D Canlı Hücre Görüntüleme Sistemi	Perkin Elmer	L7267000	Edinme ve analiz için volocity yazılımı içerir. http://www.perkinelmer.com/

Serisi Serisi Serisi