Önceden İşlem Görmüş İnsan Trombositlerinin Kollajen Kaynaklı Agregasyonunu İzlemek için Bir Türbidimetrik Analiz

Özet

Kaynak: Molica, F. ve diğerleri, İnsan Yıkanmış Trombositler Üzerinde Türbidimetri: Pannexin1-inhibitörü Brilliant Blue FCF'nin Kollajen Kaynaklı Agregasyon Üzerindeki Etkisi.J. Vis. Uzm.(2017)

Bu video, önceden işlenmiş, yıkanmış insan trombositlerinde kollajen kaynaklı trombosit agregasyonunu değerlendirmek için türbidimetrik analizi göstermektedir. Kontrol kuyuları kollajen kaynaklı agregasyon gösterirken, yüksek konsantrasyonda inhibitörler Pannexin-1 kanallarını bloke eder, böylece değişmemiş bulanıklıktan belirgin olan kollajen kaynaklı trombosit agregasyonunu inhibe eder.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. İnsan Kanı Alımı ve Yıkanmış Trombosit İzolasyonu için Tampon Hazırlama

1. 1.4 g sitrik asit monohidrat (C₆H₈O₇ • H₂O, 66.6 mM), 2.5 g trisodyum sitrat dihidrat (Na₃C₆H₅O₇ • 2 H₂O, 85 mM) ve 2 g susuz D (+) - glikozu çözerek 100 mL sulu asit-sitrat-dekstroz (ACD) çözeltisi hazırlayın. Çözeltinin pH'ı yaklaşık 4.5'....

Sonuçlar

Şekil 1: Agregometri. (A) Agregometri için kullanılan cam küvetlerin (karıştırma mıknatısı içeren) temsili görüntüsü. Soldaki küvet dinlenme trombositlerini gösterirken, sağdaki küvet kollajen kaynaklı aktivasyondan sonra trombosit agregalarını gösterir. (B) Türbidimetrik ölçümler için 8 kuyulu bir agregometrenin temsili görüntüsü. 37 °C'de bir cam küvette bulunan tro.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Sitrik asit monohidrat (C6H8O7*H2O)	Roth	5949-29-1	göz hasarı/tahrişi tehlikesi
Trisodyum sitrat dihidrat (Na3C6H5O7*2H2O)	Sigma-Aldrich	S1804 Serisi	-
D (+) - glikoz	Sigma-Aldrich	G8270	-
Sodyum klorür (NaCl)	Sigma-Aldrich	S9888 Serisi	-
Potasyum klorür (KCl)	Sigma-Aldrich	P9541 Serisi	-
Sodyum bikarbonat (NaHCO3)	Sigma-Aldrich	S6014 Serisi	-
Sodyum dihidrojenofosfat monohidrat (NaH2PO4*H2O)	Sigma-Aldrich	S9638 Serisi	-
Magnezyum klorür hekzahidrat (MgCl2*6H2O)	Sigma-Aldrich	M9272	-
Kalsiyum klorür hekzahidrat (CaCl2*6H2O)	Sigma-Aldrich	442909	göz hasarı/tahrişi tehlikesi
N-2-hidroksietilpiperazin-N-2-etan sülfonik asit (Hepes)	ThermoFisher Bilimsel	15630	-
İnsan serum albümini	CSL Behring	00257/374	-
hidroklorik asit	Sigma-Aldrich	320331	Solunum sistemi için aşındırıcı ve tahriş edicidir. Ciddi cilt ve göz hasarlarına neden olabilir.
Eppendorf 5810 R	Balıkçı Bilimsel	-	-
Heparin	Drosspharm AG/SA	20810
Prostasiklin I2 (PGI2)	Kayman	18220	-
Patateslerden Apyrase	Sigma-Aldrich	A6535	-
Fibrinojen (Hemokomplettan)	CSL Behring	HS 73466011	-
Trombo-agragogometre SD-Medikal	SD-İnovasyon	TA8V	-
Parlak mavi FCF (Erioglaucine disodyum tuzu)	Sigma-Aldrich	80717	Uzun süreli etkileri ile sucul yaşama zararlı (Çevreye salınmasını önleyin)
Kollajen	Horm, Nycomed		-
Araşidonik asit	Biyo/Veri şirketi	C/N 101297	-
Hücre sayacı Sysmex KX-21N	Sysmex Dijital Kasa	-	-
HEPES ÜNİVERSİTESİ	Gibco (Gibco)	15630-056	-
Cam küvetler	SD-İnovasyon	THCV1000	-
Manyetik karıştırıcılar	SD-İnovasyon	THA100	-

Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Haber Bülteni Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi