Yöntem makalesi

İnfluenza A ve B Virüslerini Ölçmek için Moleküler Bazlı Bir Test

857 görüntüleme

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Otto, C. C. et al., İnfluenza Virüslerinin Hızlı Moleküler Tespiti ve Farklılaşması A ve BJ Vis. Exp. (2017)

Video, influenza virüsleri A ve B'yi ölçmek için bir testi göstermektedir. Bu test, influenzaya özgü primerler ile çentikli endonükleaz amplifikasyonunu ve moleküler işaret probları kullanılarak hedef tespitini kullanır.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

>1. Testi Çalıştırmadan Önce

NOT: İnfluenza A ve B testi, nazofaringeal sürüntü örnekleri ve viral taşıma ortamında depolanan nazofaringeal sürüntüler için onaylanmıştır. Swablar kite dahildir ve optimum performans için kullanılmalıdır. Bununla birlikte, nazal sürüntü örneklerini toplamak için suni ipek, köpük, floklu sürüntüler veya polyester burun sürüntüleri de kullanılabilir.

  1. Bir nazal sürüntü örneği almak için, swabı en görünür drenaja sahip veya en tıkalı olan burun deliğine yerleştirin. Nazik bir döndürme ile, direnç karşılanana kadar swabı burun deliğine itin ve burun deliğinden yavaşça çıkarmadan önce burun duvarına karşı birkaç kez döndürün. Swabları saklayın ve 3 ml viral taşıma ortamı (VTM) içeren şişelerde taşıyın.
    NOT: Yetersiz numune alımı hatalı sonuçlar verebileceğinden, uygun numune toplamaya dikkat edilmelidir.
    NOT: Sürüntü örnekleri alındıktan sonra mümkün olan en kısa sürede test edilmelidir. Bununla birlikte, oda sıcaklığında 2 saate kadar saklanabilir veya test hemen mevcut değilse 2-8 °C'de 24 saate kadar buzdolabında saklanabilirler. Taze toplanmış numuneler, optimum test performansı için idealdir. Numunenin yanlış işlenmesi, saklanması ve/veya taşınması hatalı sonuçlar verebilir.
    NOT: Bir ihtiyati tedbir olarak, bu testi yapan kişiler, numuneleri tutarken evrensel önlemleri izleyerek tüm numuneleri potansiyel olarak bulaşıcı olarak ele almalıdır.
  2. Testten önce tüm numuneleri oda sıcaklığına getirin.
    NOT: Tüm test bileşenleri yalnızca tek bir kullanım içindir ve birden fazla test gerçekleştirmek için kullanılmamalıdır. Farklı lot numaralarından kit bileşenlerini karıştırmayın. Son kullanma tarihi geçmiş kit reaktiflerini kullanmayın.
  3. Mavi s'yi getirinamptestten önce alıcı oda sıcaklığına. Turuncu test tabanı, oda sıcaklığına ısınmaya gerek kalmadan test edilebilir.
  4. Tüm test parçalarını kullanımdan hemen öncesine kadar folyo ambalajında bırakın. Enstrümanın yan tarafındaki güç düğmesine basarak enstrümanı açın. Kullanıcı kimliğini girin ve 'Tamam'a basın.

2. Testi Çalıştırma

  1. Test işlemine başlamak için cihaz ekranındaki 'Testi Çalıştır'a dokunun. Ekran klavyesini veya barkod tarayıcıyı kullanarak hasta kimliğini girin ve 'Tamam'a basın. Kapağı açın ve Turuncu test tabanını Turuncu test tabanı tutucusuna yerleştirin.
  2. Ekranda doğru testin görüntülendiğini onaylayın ve 'Tamam'a basın. Mavi s'yi takınampalıcıyı mavi s'ye yerleştirin.ampalıcı tutucu.
    NOT: Numune alıcısını cihaza yerleştirmeden önce açmayın çünkü bu, elüsyon tamponunun doğru çalışma sıcaklığına ulaşmasını engelleyeceğinden ve test performansını etkileyebilir.
  3. Numune alıcısının ısınmasını bekleyin. Cihaz tarafından istendiğinde, folyo contayı çıkarın ve test edilecek hasta swabını numune alıcısına yerleştirin.
    NOT: Folyoyu çıkarırken, yerinde kaldığından emin olmak için iki parmağınızı S'nin kenarına yerleştirin.ampAlıcı.
  4. Swabı sıvı içinde 10 saniye boyunca kuvvetlice karıştırın, numuneyi swabdan çıkarmaya yardımcı olmak için karıştırırken swab kafasını numune alıcısının yan tarafına doğru bastırın. Devam etmek için 'Tamam'a basın. Test çubukları viral bir taşıma ortamında saklanıyorsa, VTM'yi 10 saniye boyunca girdap haline getirin ve ardından numune alıcısına 200 μl ekleyin.
  5. Beyaz transfer kartuşunu mavi numune alıcısına bastırın. S'ye basmaya devam edinampturuncu gösterge yükselene kadar alıcı.
  6. Transfer kartuşunu kaldırın ve ardından test tabanına bağlayın. Kartuş aktarımı doğru şekilde takıldıktan sonra turuncu göstergenin indiğini gözlemleyin. Kapağı kapatın ve ekranda "Test Tamamlandı" mesajı görünene kadar açmayın.

3. Kalite Kontrol (QC)

  1. Ana ekranda 'QC Testini Çalıştır'a dokunun. Çalıştırılacak QC Testini seçin. 'Tamam'a dokunarak ve testi tamamlamak için ekrandaki talimatları izleyerek test türünün, test için amaçlanan QC örneğiyle eşleştiğini onaylayın.

4. Sonuç Yorumlama

  1. Test çalıştırması tamamlandıktan sonra, İnfluenza A, B ve bilinmeyen alt tiplerin varlığına ilişkin yorumlarla birlikte ekranda görüntülenen testin sonuçlarını gözlemleyin. Geçersiz sonuçlar için testi tekrarlayın.

5. Bakım ve Temizlik

  1. Cihazı ve çevresindeki tezgah alanını günlük olarak %70 etanol veya %10 çamaşır suyu solüsyonu ile temizleyin. Temizleme solüsyonunu temizlemek için nemli, tüy bırakmayan bir beze püskürtün. Çözeltileri doğrudan cihazın üzerine dökmeyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alere i EnstrümanAlereNAT-000 (Küresel), NAT-024 (ABD)
Alere i Influenza A & B 24 Test KitiAlere425-000 (Küresel), 425-024 (ABD)
Alere i Barkod OkuyucuAlereEQ001001
Alere Üniversal YazıcıAlere55115 (Küresel), alereiprinter (ABD)
200 μL hassas pipet
200 μL tek kullanımlık pipet uçları
Viral taşıma ortamıRemel BelediyesiM4-RT
Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

nfluenza A Tespitinfluenza B Tespitientikleyici Endon kleaz AmplifikasyonuMolek ler Fener ProblarViral RNA AmplifikasyonuFloresan KantifikasyonuNazofaringeal rnek lemeTransfer Kartu u Kullan mrnek Al c Haz rlamaQC Test Validasyonu

İlgili makaleler