Yöntem makalesi

Manyeto-floresan nanosensörler kullanarak bakteriyel kontaminasyonu tespit etme

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Shelby, T., Sulthana, S., McAfee, J., Banerjee, T., Santra, S. Manyeto-floresan Nanosensör Kullanarak Gıda Kaynaklı Patojen Taraması: E. Coli O157:H7'nin Hızlı Tespiti. J. Vis. Exp. (2017).

Bu videoda, nanosensörler kullanarak gıda ve su numunelerindeki bakteriyel kirleticileri tespit etmek için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. Hedef patojenik bakteriler, manyetik gevşeme ve floresan emisyon modalitelerinin bir kombinasyonu ile tespit edilir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. MFnS kullanarak E. coli O157:H7'nin Hızlı Tespiti

  1. Çeşitli PBS çözeltilerini (1X, pH 7.4, 300 μL) artan miktarlarda 10-6 bakteri stoğu ile dökün, bu da 1-100 arasında CFU aralıkları ile sonuçlanır. Bu çözeltilere tutarlı miktarda MFnS (100 μL) ekleyin.
  2. Yalnızca PBS (1X, pH 7.4, 300 μL) ve MFnS (100 μL) içeren bir temel çözelti oluşturun.
  3. Çözeltileri 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin ve ardından oda sıcaklığına soğumaya bırakın.
  4. Bireysel çözeltileri manyetik gevşetme ölçere (0,47 Tesla) aktarın ve her çözümdeki CFU'lara göre gevşeme sürelerindeki (T2) değişiklikleri kaydedin.
    1. T2 değerlerindeki değişiklikleri kaydetmek için, yalnızca PBS ve MFnS içeren temel çözümün T2 değerini ölçerek başlayın.
      1. Çözeltiyi manyetik gevşeklik ölçere yerleştirin. İlgili yazılımı açın, "T2 gevşeme" ayarını seçin ve "ölç"e basın.
      2. Başlangıç T2'nin toplanmasını takiben, çeşitli bakteri konsantrasyonları ile çivilenmiş ek çözeltilerin T2 değerlerini ölçün.
        not: T2'deki değişiklik, çivili T2'den çıkarılan taban çizgisi T2'ye eşdeğerdir.
  5. Manyetik gevşetme cihazından numuneleri çıkarın ve tüpleri 10 dakika boyunca 2880 x g'da santrifüjleyin.
  6. Süpernatanı boşaltın ve bakteri peletlerini 100 μL PBS'de (1X, pH 7.4) yeniden süspanse edin.
  7. 96 oyuklu bir plakaya her bir yeniden süspansiyondan 80 μL ekleyin ve floresan yoğunluklarını 595 nm.
    'de kaydedin not: Test, sonuçlar bölümünde açıklandığı gibi göl suyu, süt ve diğerleri dahil olmak üzere farklı çözücüler kullanılarak tekrarlanabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Demir Klorür TetrahidratBalıkçı BilimselI90-500
Ferrik Klorür HekzahidratBalıkçı BilimselI88-500
Amonyum HidroksitBalıkçı BilimselA669S-500
hidroklorik asitBalıkçı BilimselA144S-500
Poliakrilik AsitSigma-Aldrich323667-100G
EdcThermofisher Bilimsel22980
NhsBalıkçı BilimselAC157270250
Anti-E. coli O111 antikoruSera bakımı5310-0352
Anti-E. coli O157:H7 antikoru [P3C6Abcam Belediyesiab75244
DiI LekesiBalıkçı BilimselD282
Besin SuyuDifco Bilişim233000
Dondurularak kurutulmuş E. coli O157:H7 peletiATCC (Uzay Servisi)700728
Manyetik GevşeticiBrukerMQ20
Zetasizer (Zetasizer)MalvernNANO-ZS90 Serisi
Plaka OkuyucuTecanSonsuz M200 PRO
Manyetik SütunQuadroMACS (Dörtlü)130-090-976
merkezkaçEppendorf Belediyesi5804 Serisi
Santrifüj (accuSpin Micro 17)Balıkçı Bilimsel13-100-676
Zemin Modeli Sallama İnkübatörüEL LABORATUVARISSI5
Analitik TeraziMetler ToledoME104E
Dijital Vorteks KarıştırıcıBalıkçı Bilimsel02-215-370
Açık Hava Sallanan ÇalkalayıcıBalıkçı Bilimsel02-217-765
Serisi Serisi Serisi Serisi Gazetesi Adet (İngilizce) Serisi Teknolojileri Serisi Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Magneto fluorescent NanosensorsBacterial Contamination DetectionMagnetic RelaxationFluorescence EmissionT2 Relaxation TimeBacterial CFU DetectionCentrifugation IsolationMagnetic RelaxometerNanosensor ClusteringFoodborne Pathogen Screening

İlgili makaleler