Toksin Maruziyetinin Minyatür Uyarıcı Postsinaptik Akımlar (mEPSC'ler) Üzerindeki İnhibitör Etkisini Değerlendirme Tekniği

Özet

Kaynak: Hubbard, K. et. al., Kök Hücre Kaynaklı Merkezi Sinir Sistemi Nöronlarının Ağa Bağlı Kültürlerinde Biyolojik Nörotoksinlerin Fonksiyonel Değerlendirmesi.J. Vis. Uzm. (2015)

Video, nörotoksinlere maruz kaldıktan sonra embriyonik kök hücre türevli nöronların elektrofizyolojik analizini göstermektedir. Bu nöronların botulinum nörotoksinleri ile tedavi edilmesi, spontan minyatür uyarıcı post-sinaptik akımların sıklığını azaltır ve sinaptik iletimin inhibisyonunu doğrular.

Protokol

1. Embriyonik kök hücrelerin (ESC'ler) Besleyici Hücresiz Süspansiyon Kültürüne adaptasyonu

1. ESC'leri bir parça buz kalana kadar 37 °C'de çözün.
2. Bir P1000 pipeti kullanarak, 1 - 2,5 x 10⁶ ayrışmış ESC'yi, 10 ml önceden ısıtılmış ESC ortamı içeren doku kültürü ile muamele edilmemiş bir kaba nazikçe aktarın. Nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatöründe 37 ° C'de ve% 5 karbondioksitte (CO₂) 20 saat inkübe edin.
3. 20 saat sonra, süspansiyon kültürünü 10 ml'lik bir serolojik pipet kullanarak 15 ml'lik bir konik tüpe nazikçe aktararak hücreleri yıkayın. Pelet ESC'leri 200 x g'da 3 dakika boyunca. Sıkma sırasında, düşük yapışma özelliğine sahip bir kaba 10 ml taze ESC ortamı ekleyin.
4. Hücre peletinin yerinden çıkmasını önlemeye dikkat ederek süpernatanı aspire edin ve hücre peletine 1 ml taze ESC ortamı ekleyin. Bir P1000 pipeti kullanarak hücreleri bakteri kabına aktarın ve inkübatöre geri dönün.
5. Agregalar çıplak gözle görülebilene kadar hücreleri günlük olarak gözlemleyin (tipik olarak 4 - 8 gün (d); agregalar 0,2 - 0,5 mm olacaktır). 4 d'den sonra agregalar görünmüyorsa, adım 1.3'ü tekrarlayın. Agregalar görünür hale geldikten sonra, Bölüm 2'de açıklandığı gibi ESC'leri ayırın ve koruyun.

2. ESC Geçişi ve Bakımı

1. ESC agregalarını steril 10 ml'lik bir pipet kullanarak 15 ml'lik bir konik tüpe aktarın ve agregaların kompakt bir peletiğe (tipik olarak 3-5 dakika) çökelmesine izin verin. Hücre peletini bozmamaya dikkat ederek süpernatanı aspire edin ve agregaları 5 ml fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkayın. Yerçekimi çökeltmesi önerilse de, alternatif olarak, zamandan tasarruf etmek için 2,5 dakika boyunca 100 x g'da pelet hücreleri.
2. PBS'yi aspire edin ve 500 μl tripsin ekleyin. Agregaları tripsin içinde 37 ° C'de bir su banyosunda 3 dakika inkübe edin. Tripsini seyreltmek için 500 μl ESC ortamı ekleyin ve agregaları parçalamak için bir P1000 pipeti ile 10 kez hafifçe ezin. Bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın.
3. Pelet, hücreleri 200 x g'da 3 dakika boyunca ayrıştırır ve hücreleri ESC ortamında 1.0 x 10⁷ hücre / ml'lik bir nihai konsantrasyona yeniden süspanse eder. 150 μl (1.5 x 10⁶ hücre) 10 cm'lik bir bakteri kabında 10 ml taze ESC ortamına aktarın ve 48 saat boyunca doku kültürü inkübatörüne geri dönün. Fazla ESC'ler ayırt edilebilir, %10 dimetil sülfoksit (DMSO) ile desteklenmiş %90 ESC ortamında 1 - 5 x^{10 6} hücre / ml'de kriyoprezerve edilebilir veya atılabilir.
4. Her 48 saatte bir geçiş agregaları. Geçişe hazır agregalar, çapları 0,5 mm'yi aşan şekilde açıkça görülecektir.
   not: Kriyoprezervasyonlu, süspansiyona adapte olmuş hücrelerin çözülmesi ve kültürü, 1.2 - 1.4 adımlarına göre gerçekleştirilir. Agregalar 48 - 72 saat içinde geçişe hazır olacaktır.

3. Nöronal Farklılaşma

NOT: 3.1 - 3.5 arasındaki adımları öğleden önce ve 3.7 adımını öğleden sonra gerçekleştirin. Farklılaştırma prosedürlerine genel bir bakış Şekil 1A'da sunulmuştur.

1. ESC'leri adım 2.1 - 2.5'teki gibi ayırın. 350 μl (3,5 x 10⁶) ayrışmış ESC'leri 25 ml farklılaşma ortamı içeren 10 cm'lik düşük bağlantılı bir kaba aktarın. % 5 CO 2 ile 37 ° C'de bir doku kültürü inkübatörü içinde 30 - 45 rpm'ye ayarlanmış bir orbital çalkalayıcıya_{yerleştirin.} Bu, in vitro gün (DIV) -8.
   olarak adlandırılan farklılaşmanın ilk günüdür not: Ultra düşük bir bağlantı kabı kullanmak, yöntemin maliyetini artırır, ancak agregalar bazen Petri kaplarına yapışabileceğinden, bakteriyel Petri kaplarından biraz daha büyük verim sağlar. Farklı tabak boyutları tercih edilirse, orta hacimler ve hücre sayıları buna göre ölçeklendirilebilir.
2. 48 saat (DIV -6) sonra, farklılaşan hücre agregalarını 50 ml'lik konik bir tüpe aktarmak için 25 ml'lik bir pipet kullanın. Petri kabına hemen 25 ml'lik taze bir farklılaşma ortamı ekleyin.
3. Agregaların 2 - 5 dakikadan fazla çökmesine izin verin, 1 - 2 mm derinliğinde görünür bir pelet üretin. Süspansiyonda kalan tek hücreleri veya küçük agregaları göz ardı edin. Ortamı dikkatlice aspire edin ve hücre peletini bir P1000 kullanarak petri kabına geri aktarın. Bir doku kültürü inkübatöründe döner çalkalayıcı üzerine yerleştirin.
4. DIV -4'te adım 3.2'yi tekrarlayın. Pelet 2 - 4 mm derinliğinde olacaktır. 6 μM all-trans retinoik asit (RA) ile takviye edilmiş 30 ml farklılaşma ortamını petri kabına değiştirin. 48 saat daha doku kültürü inkübatöründeki döner çalkalayıcıya geri dönün.
5. DIV -2'de adım 3.3'ü tekrarlayın. Pelet bu noktada 4 - 8 mm derinliğinde olacaktır.
6. DIV -1'de kaplama yüzeylerini Bölüm 4'teki gibi hazırlayın.
7. DIV 0'da, 5 ml önceden ayrılmış ve donmuş nöral progenitör hücreler (NPC) tripsinizasyon ortamını 37 ° C'de 5-10 dakika boyunca çözdürün ve bir doku kültürü başlığına yerleştirin. 25 ml'lik bir pipet kullanarak, farklılaşan agregaları 50 ml'lik konik bir tüpe aktarın. Agregaların çökelmesine ve ortamı dikkatlice aspire etmesine izin verin. Peletleri 10 ml PBS ile iki kez yıkayın, böylece agregaların yıkamalar arasında çökmesine izin verin.
8. İkinci PBS yıkamasından sonra, pelete 5 ml NPC tripsinizasyon ortamı ekleyin ve 37 ° C'de 5 dakika inkübe edin.
9. Tripsini inaktive etmek için 5 ml %0.1 soya fasulyesi tripsin inhibitörü (STI) ekleyin ve ters çevirerek karıştırın. Nispeten homojen bir hücre süspansiyonu üretilene kadar 10 ml'lik bir serolojik pipet ile 10 - 15 kez hafifçe ezin.
10. Hücre süspansiyonunu, 50 ml'lik konik bir tüpün üstüne yerleştirilmiş 40 μm veya 70 μm'lik bir hücre süzgecine yavaşça aktarın. Tüm süspansiyon süzüldükten sonra, kalan hücreleri filtreden yıkamak için 1 ml N2 ortamı ekleyin ve ayrışmış hücre süspansiyonunu 200 x g'da 6 dakika boyunca peletleyin.
11. Peleti bozmadan ortamı aspire edin. Hücreleri 10 ml N2 ortamı ile iki kez, pelet hücrelerini 200 x g'da 5 dakika boyunca yıkayın ve yıkamalar arasında bir P1000 ile ezin. İkinci yıkamadan önce, bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın.
12. Hücreleri N2 ortamında ml başına 1 x 10⁷ hücrede ve 150.000 - 200.000 hücre/^cm2 hücre yoğunluğunda plaka embriyonik kök hücre türevli nöronlarda (ESN'ler) yeniden süspanse edin.
13. Yeni kaplanmış ESN'leri 37 °C ve %5 CO_2'de nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatörüne aktarın ve Bölüm 5'teki gibi muhafaza edin.

4. DIV 0'da Nöral Öncülleri Kaplamak için Kültür Yüzeylerinin Hazırlanması

1. Kaplamadan en az 1 gün önce doku kültürü ile muamele edilmiş yemekler hazırlayın. Doku kültürü ile muamele edilmiş plastik tabakları kaplamak için yeterli polietilenimin (PEI; steril H₂O'da 25 μg / ml) veya poli-D-lizin (PDL; steril H₂O'da 100 μg / ml) ekleyin ve O/N'yi 37 °C'de inkübe edin.
2. Kaplama sabahı, bulaşıkları iki kez çift damıtılmış H₂O ve bir kez PBS ile yıkayın. Son yıkamadan sonra, tabağı kaplamak için yeterli N2 ortamı ekleyin (ör., 12 oyuklu bir tabağın oyuğu başına 1 ml veya 6 cm'lik tabak başına 4 ml).
3. Nöron kaplamadan en az bir gün önce 18 mm'lik cam lameller hazırlayın. Lamelleri 4 dakika boyunca plazma temizliği ile temizleyin.
4. Temizlenmiş lamelleri hemen büyük bir steril kabın dibindeki etanolle yıkanmış bir parafilme aktarın ve adım 4.1'deki gibi hazırlanan 400 μl PEI veya PDL çözeltisi ekleyin. Bir doku kültürü inkübatöründe 37 ° C'de gece boyunca (O / N) inkübe edin.
5. Sabahları lamelleri üç kez suyla yıkayın ve 37 ° C'de 1 - 3 saat boyunca PBS'ye 5 μg / ml laminin ekleyin. Nöronları ayırmadan önce, laminini aspire edin ve lameli hemen 1 ml NPC ortamı içeren 12 oyuklu bir tabağın kuyusuna aktarın, tedavi edilen tarafı yukarı bakacak şekilde tuttuğunuzdan emin olun.
6. Bulaşıkları ve lamelleri NPC'ler tabağa hazır olana kadar 37 °C'de saklayın.

5. Nöronların Bakımı

1. DIV 1'de, besiyerini aspire edin ve N2 kültür besiyeri ile değiştirin.
2. DIV 2 ve 4'te besiyerini aspire edin ve B27 kültür besiyeri ile değiştirin.
3. DIV 8'de, besiyerini aspire edin ve kontamine nöronal olmayan hücreleri ortadan kaldırmak için mitotik inhibitörler içeren B27 kültür ortamı ile değiştirin.
4. DIV 12'de B27 kültür ortamı ile değiştirin.
5. Hazır olana kadar DIV 12⁺ ESN'leri %5 CO_2'den çıkarmayın.

>6. Minyatür Uyarıcı Post-sinaptik Akımları Ölçmek için Sinaptik İletimin Ölçülen İnhibisyonu (MIST) Testi

DİKKAT: Clostridial nörotoksinler bilinen en zehirli maddelerdir ve tahmini insan LD₅₀ değerleri 0,1 - 1 ng/kg kadar düşüktür. Bu toksinleri kullanmadan önce gerekli onayları alın ve uygun önlemleri alın.

1. BoNT / A'yı ESN kültür ortamında istenen nihai konsantrasyon olan 100x'e dikkatlice seyreltin ve 37 ºC'ye ısıtın. DIV 21+ ESN kültürlerine uygun hacimde toksin ekleyin, kültür kabını döndürün ve inkübatöre geri dönün.
2. Hücreler zehirlenmeden 4 saatten daha uzun bir süre sonra analiz edilecekse, tabağa bir toksin ekleyin ve doğrudan inkübatörde veya sabit bir CO₂ odasında olduğu gibi% 5 CO_2'den çıkarmadan döndürün.
3. Uygun zaman noktasında, ESN kültür ortamını aspire edin ve hücre dışı kayıt tamponu (ERB) ile iki kez yıkayın. Sırasıyla 5.0 μM tetrodotoksin ve 10 μM bikükülin ile desteklenmiş 4 ml ERB ekleyin, aksiyon potansiyellerini bloke edin ve GABA_A reseptör aktivitesini antagonize edin.
4. Çanağı elektrofizyoloji teçhizatına aktarın. MIST testi için ne perfüzyon ne de sıcaklık kontrolü gerekli değildir.
5. 5-10 mΩ dirençli bir kayıt pipeti üretmek için bir mikropipet çektirme kullanarak borosilikat camı çekin ve hücre içi kayıt tamponu ile doldurun. Kayıttan önce doldurulmuş kayıt pipetini silikonlaştırıcı reaktife hafifçe batırın.
6. Hava dolu bir şırınga kullanarak, kayıt pipeti ERB'ye indirilirken pozitif basınç sağlayın. Kayıt pipetini kaydedilecek nöronun soma'sına nazikçe indirdikten sonra, pozitif basıncı kaldırın ve bir gigaseal oluşturun. Tutma voltajını -70 mV'a düşürün. Tüm hücre konfigürasyonuna girmek için dikkatlice negatif basınç uygulayın.
7. Akım cl'ye geçinamp dinlenme membran potansiyelini izlemek ve kaydetmek için. Sıvı bağlantı potansiyelleri için ayarlama yapılmazsa, dinlenme membran potansiyeli -67 ile -82 mV arasında olacaktır.
8. Minyatür uyarıcı post-sinaptik akımları (mEPSC'ler) tespit etmek için 4 - 5 dakika boyunca sürekli -70 mV voltaj-kelepçe kaydı gerçekleştirin.
9. Aşağıdaki ayarlara sahip ani artış algılama yazılımını kullanarak mEPSC tespiti için kaydedilen 4 dakikalık verileri analiz edin: Eşik, 5; Yerel bir maksimum arama süresi, 10.000 μsn; Taban çizgisi için zirveden önceki süre, 5.000 μsn; Bozunma süresini arama süresi, 20.000 μsn; Bir bozunma süresi bulmak için zirvenin kesri, 0.37; Bir taban çizgisinin ortalamasına kadar geçen süre, 1.000 μsn; Alan eşiği, 20; Ortalama zirveye kadar olan puan sayısı, 1; Tepe yönü, negatif.
10. Algılanan olaylarla ilgili bilgileri toplayın ve kaydedin. mEPSC frekansını Hz cinsinden belirlemek için 4 dakika içinde algılanan olayların sayısını 240'a bölün.
11. Her maruz kalma koşulu için 8 - 12 kontrol ve 8 - 12 BoNT ile muamele edilmiş numune için mEPSC frekanslarını toplayın. Yaş ve lot eşleşen kontrollere göre sıklığı analiz edin. Tek yönlü ANOVA ve Dunnett'in post-hoc testini kullanarak sinaptik aktivitenin % inhibisyonunun istatistiksel anlamlılığını belirleyin.

Sonuçlar

Şekil 1. Süspansiyona uyarlanmış ESN'ler mitotik olarak stabil kalır ve pluripotentlik belirteçlerini ifade eder.(A) ESC bakım ve farklılaşma şeması. Retinoik asit (RA) veya lösemi inhibitör faktörünün (LIF) varlığı veya yokluğu + veya - ile işaretlenir. Primer nöron kültürleri için in vitro (DIV) ve klasik gelişim aşamaları (DS) arasında bir karşılaştırma sağlanmıştır. (

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Tablo 1. ESC ve ESN
Nakavt DMEM	Yaşam Teknolojileri	10829-018	Medya: ESC kültür ortamı
			Formülasyon ve notlar: 500 mL
100x MEM NEAA	Yaşam Teknolojileri	11140-050	Ortam: 4 °C'de 1 aya kadar saklayın
			Formülasyon ve notlar: 6 mL
200 mM L-Alanil-L-Glutamin	ATCC (Uzay Servisi)	30-2115	6 mL
ES nitelikli FBS	Uygulanan Kök Hücre	ASM-5007	90 mL
100x antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955	3 mL
55 mM 2-merkaptoetanol	Yaşam Teknolojileri	21985-023	1.1 mL
107 Birim/mL LIF	Kırlangıç	ESG1107	60 μL
Nakavt DMEM	Yaşam Teknolojileri	10829-018	Medya: ESC farklılaştırma ortamı
			Formülasyon ve notlar: 436.6 mL
100x MEM NEAA	Yaşam Teknolojileri	11140-050	Ortam: 4 °C'de 1 aya kadar saklayın
			Formülasyon ve notlar: 5 mL
200 mM L-Alanil-L-Glutamin	ATCC (Uzay Servisi)	30-2115	5 mL
ESC onaylı serum	Uygulanan Kök Hücre	ASM-5007	50 mL
100x antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955	2,5 mL
55 mM 2-merkaptoetanol	Yaşam Teknolojileri	21985-023	0,9 mL
Dulbecco'nun PBS'si	Sigma-Aldrich	D8537	Medya: NPC tripsinizasyon ortamı
			Formülasyon ve notlar: 100 mL
0,5 M EDTA (% 18,3)	Sigma-Aldrich	3690	Medya: 5 mL'de dondurun aliquote
			Formülasyon ve notlar: 0.266 mL
Tripsin	Sigma-Aldrich	T8802	50 mg
Polietilenimin (PEI)	Sigma-Aldrich	P3143 Serisi	Medya: Yüzey kaplama çözümleri
			Formülasyon ve notlar: H20'de 2,5 μg/mL
Poli-D-lizin (PDL)	Sigma-Aldrich	P7280 Serisi	Medya: 1 hafta içinde kullanın
			Formülasyon ve notlar: H20'de 100 μg/mL
Laminin	Sigma-Aldrich	L2020	H20 içinde 5 μg/mL
DMEM/F12 + GlutaMAX	Yaşam Teknolojileri	10565-018	Medya: NPC kültür ortamı
			Formülasyon ve notlar: 492,5 mL
100x N2 vitamini	Yaşam Teknolojileri	17502-048	Ortam: 4 °C'de 1 aya kadar saklayın
			Formülasyon ve notlar: 5 mL
100x antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955	2,5 mL
Nörobazal A	Yaşam Teknolojileri	10888-022	Medya: ESN kültür ortamı
			Formülasyon ve notlar: 482,5 mL
50x B27 vitamini	Yaşam Teknolojileri	17504-044	Medya: 4 °C'de 1 aya kadar saklayın
			Formülasyon ve notlar: 10 mL
200 mM L-Alanil-L-Glutamin	ATCC (Uzay Servisi)	30-2115	5 mL
100x antibiyotik	Sigma-Aldrich	A5955	2,5 mL
5-floro-2'-deoksiüridin (5FDU)	Sigma-Aldrich	F0503	Ortam: 2000x Mitotik inhibitörler alikot ve -20 ° C'de saklayın
			Formülasyon ve notlar: dd 150 mg 5FDU ve 350 mg üridin ila 10 mL Nörobazal A. Steril filtre, alikot ve dondurma. ESN kültür ortamında 2000x kullanın.
üridin	Sigma-Aldrich	U3003
TrypLE Ekspres Tripsin	Yaşam Teknolojileri	12605-010	Medya: Çeşitli
			Formülasyon ve notlar: RT'de saklayın
DMSO (Türkçe)	Sigma-Aldrich	D8418	RT'de mağaza
Soya fasulyesi tripsin inhibitörü (CYBE)	Sigma-Aldrich	T6414	-20 °C'de saklayın
etanol	Sigma-Aldrich	E7023	RT'de mağaza
Askorbik asit	Sigma-Aldrich	A4403	100 mg askorbik asidi 5.7 mL 50:50 DMSO / etanol karışımı içinde çözerek 100 mM stok hazırlayın.
Retinoik asit (RA)	Sigma-Aldrich	R2625 Serisi	15 mg RA'yı 9 mL 50:50 DMSO / etanol içinde yeniden süspanse edin. 1 mL 100 mM askorbik asit stoğu ile takviye edin. Aliquot ve -80 °C'de saklanır. 6 ay boyunca kararlıdır.
Tablo 2. Sis
NaCl (Doğal)	Sigma-Aldrich	71386	Medya: Hücre Dışı Kayıt Tamponu
			Son Konsantrasyon (mM): 58.44
			MW: 140
Kartal	Sigma-Aldrich	60135	Ortam: (ERB; pH = 7.3, 315 mO)
			Son Konsantrasyon (mM): 74.56
			MW: 3.5
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	S3139 Serisi	Ortam: 4 °C'de en az 6 ay stabildir.
			Son Konsantrasyon (mM): 119.98
			MW: 1.25
CaCl2	Sigma-Aldrich	21115	Son Konsantrasyon (mM): 110.98
			MW: 2
MgCl2	Sigma-Aldrich	63069	Son Konsantrasyon (mM): 95.21
			MW: 1
D-glikoz	Sigma-Aldrich	G8644	Nihai Konsantrasyon (mM): 180.16
			MW: 10
HEPES ÜNİVERSİTESİ	Sigma-Aldrich	H0887	Son Konsantrasyon (mM): 238.3
			MW: 10
K-glukonat	Sigma-Aldrich	P1847 Serisi	Medya: Hücre İçi Kayıt Tamponu
			Son Konsantrasyon (mM): 234.5
			MW: 140
NaCl (Doğal)	Sigma-Aldrich	71386	Ortam: (IRB; pH = 7.3, 320 mO)
			Son Konsantrasyon (mM): 58.44
			MW: 5
Mg-ATP	Sigma-Aldrich	A9187	Ortam: 4 °C'de en az 6 ay stabildir.
			Son Konsantrasyon (mM): 507.18
			MW: 2
Li-GTP (Çelik)	Sigma-Aldrich	G5884	Son Konsantrasyon (mM): 523.18
			MW: 0.5
CaCl2	Sigma-Aldrich	21115	Ortam: 4 °C'de en az 6 ay stabildir.
			Son Konsantrasyon (mM): 110.98
			MW: 0.1
MgCl2	Sigma-Aldrich	63069	Ortam: 4 °C'de en az 6 ay stabildir.
			Son Konsantrasyon (mM): 95.21
			MW: 1
EGTA (EGTA)	Sigma-Aldrich	E3889	380.35 Medya: En az 6 mo. için 4 ° C'de stabil Son Konsantrasyon (mM): 380.35 MW: 1
HEPES ÜNİVERSİTESİ	Sigma-Aldrich	H0887	Ortam: 4 °C'de en az 6 ay stabildir.
			Son Konsantrasyon (mM): 238.3
			MW: 10
Bikülin	Tocris (Türkçe)	131	Medya: Çeşitli
			Son Konsantrasyon (mM): 0.01
			MW: 417.85
CNQX (Türkçe)	Sigma-Aldrich	C239	Son Konsantrasyon (mM): 0.01
			MW: 276.12
Tetrodotoksin	Sigma-Aldrich	A8001	Son Konsantrasyon (mM): 0.005
			MW: 645.74
BoNT/A-/G	Metabiyolojikler	Yok	medya:
			Son Konsantrasyon (mM): TBD
			MW: 150.000
Tetanoz toksini	Sigma-Aldrich	T3194	Son Konsantrasyon (mM): TBD
			MW: 150.000
Sigmacote Belediyesi	Sigma-Aldrich	SL-2	Son Konsantrasyon (mM): Yok
			MW: Yok
Tablo 3. Ekipman ve Yazılım
MiniAnalysis (sürüm 6.0.7)	Synaptosoft, Inc.	Yok	Olay algılama yazılımı
Igor Pro (sürüm 6.22A)	Dalga Metrikleri	Yok	Kayıtların görselleştirilmesi için yazılım
Yama Ustası	Heka (Türkçe)	Yok	Veri toplama yazılımı
Olympus IX51 ters mikroskop	Olympus	Yok
Mikromanipülatör	Sutter Enstrümanı	MPC-365
Yama kelepçesi amplifikatörü	Heka (Türkçe)	ECB10USB
Mikropipet çektirme	Sutter Enstrümanı	P-1000
Borosilikat kılcal borular	Sutter Enstrümanı	B150-86-10	İkinci El Corning 7740
18 mm cam lameller	balıkçı	12-545-84
Plazma temizleyici	Harrick Plazma	PDC-32G
Hücre süzgeci (40 μm)	balıkçı	08-771-1
Stovall Dansöz Çalkalayıcı	balıkçı	15-453-211
Düşük yapışma özelliğine sahip tabaklar	balıkçı	05-539-101	İkinci El Corning 3262
Bakteriyel yemekler	VWR (VWR)	25384-302	100 x 15 mm

Serisi Gazetesi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi adet Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Yılı Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Serisi Serisi