Bir Metallopeptidaza Karşı Monoklonal Antikorlar Üretmek için Bir Hibridoma Teknolojisi

Özet

Kaynak: Xia, P., et al. Domuz Bağırsak Mukozal Epitelinde Aminopeptidaz N'yi Hedefleyen Monoklonal Antikorların Üretimi. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, geleneksel bir hibridoma teknolojisi kullanılarak zara bağlı bir metallopeptidaz olan domuz aminopeptidaz N'ye (APN) karşı monoklonal antikorlar üretmek için yapılan bir test gösterilmektedir. Bir fareyi APN ile aşıladıktan sonra, dalak hücreleri toplanır ve hibridomlar üretmek için ölümsüz miyelom hücreleri ile kaynaştırılır. Hibridomlar daha sonra farklı APN epitoplarına özgü monoklonal antikorlar üretmek için HAT (hipoksantin-aminopterin-timidin) ortamı kullanılarak seçilir ve çoğaltılır.

Protokol

Tüm hayvan modeli prosedürleri, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Hayvan bağışıklaması

1. Deri altı (s.c), 6-8 haftalık dişi BALB / c farelerine, her 2 haftada bir adjuvanlarla karıştırılmış 50 μg APN proteini veya fosfat tamponlu salin (PBS, negatif kontrol) enjekte eder. İlk bağışıklama için ısıyla öldürülmüş Mikobakterileri içeren tam Freund adjuvanını ve güçlendirici aşılamalar için eksik Freund adjuvanını kullanın. Sırasıyla eşit hacimlerde APN proteini (veya PBS) ve Freund'un adjuvanını veya eksik Freund'un adjuvanını karıştırın.
<....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Freund'un adjuvanını tamamlayın	Sigma-Aldrich	F5881	Hayvan bağışıklaması
DMEM (Ömer Çiçeğ	Gibco (Gibco)	11965092	Hücre kültürü
DMEM-F12	Gibco (Gibco)	12634010	Hücre kültürü
Geliştirilmiş Hücre Sayım Seti-8	Beyotime Biyoteknoloji	C0042	Hücre canlılığının ve canlılığının ölçülmesi
Fetal sığır serumu	Gibco (Gibco)	10091	Hücre kültürü
Genetik™ Seçici Antibiyotik	Gibco (Gibco)	11811098	Seçici antibiyotik
ŞAPKA Takviyesi (50X)	Gibco (Gibco)	21060017	Hücre seçimi
HT Takviyesi (100X)	Gibco (Gibco)	11067030	Hücre seçimi
Eksik Freund'un adjuvanı	Sigma-Aldrich	F5506	Hayvan bağışıklaması
Mikroplaka okuyucu	BioTek	KUTU 998	ELISA analizi
Polietilen glikol 1500	Roche Diagnostik	10783641001	Hücre füzyonu
96 oyuklu mikroplaka	Corning	3599	Hücre kültürü

Gazetesi Serisi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Teknolojisi adet