Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
826 görüntülenme
⸱
8 Temmuz 2025
Kaynak: Xia, P. ve ark., Domuz Bağırsak Mukozal Epitelinde Aminopeptidaz N'yi Hedefleyen Monoklonal Antikorların Üretimi.J. Vis. Uzm.(2021)
Bu video, metallopeptidaza karşı rekombinant antikorların üretimi için bir prosedürü göstermektedir. Antikor, yeşil floresan proteini ve antibiyotik direnci genlerini taşıyan rekombinant plazmitler, lipofektamin ile epitel hücrelerine transfekte edilir. Transfekte edilen hücreler, rekombinant antikorlar oluşturmak için seçilir ve yetiştirilir.
1. Domuz aminopeptidaz N (APN) protein antijeninin hazırlanması
>NOT: pET28a (+)-APN-BL21 (DE3) suşu ve APN kararlı bir şekilde eksprese edilen hücreler pEGFP-C1-APN-IPEC-J2 önceki bir çalışmada oluşturulmuştur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Freund'un adjuvanını tamamlayın | Sigma-Aldrich | F5881 | Hayvan bağışıklaması |
| DAPI (DAPI | Beyotime Biyoteknoloji | C1002 | Nükleer karşı leke |
| DMEM (Ömer Çiçeğ | Gibco (Gibco) | 11965092 | Hücre kültürü |
| DMEM-F12 | Gibco (Gibco) | 12634010 | Hücre kültürü |
| Dylight 549-konjuge keçi anti-fare IgG ikincil antikoru | Abbkine (Abbkine | A23310 | Dolaylı immünofloresan analizi |
| Geliştirilmiş Hücre Sayım Seti-8 | Beyotime Biyoteknoloji | C0042 | Hücre canlılığının ve canlılığının ölçülmesi |
| Fetal sığır serumu | Gibco (Gibco) | 10091 | Hücre kültürü |
| Genetik™ Seçici Antibiyotik | Gibco (Gibco) | 11811098 | Seçici antibiyotik |
| ŞAPKA Takviyesi (50X) | Gibco (Gibco) | 21060017 | Hücre seçimi |
| HT Takviyesi (100X) | Gibco (Gibco) | 11067030 | Hücre seçimi |
| Eksik Freund'un adjuvanı | Sigma-Aldrich | F5506 | Hayvan bağışıklaması |
| İzopropil β-d-1-tiyokalaktopiranosit | Sigma-Aldrich | I5502 Serisi | Protein ekspresyonu |
| Kanamisin | Beyotime Biyoteknoloji | ST102 | Bakterisidal antibiyotik |
| Leica TCS SP8 STED konfokal mikroskop | Leica Mikro Sistemler | SP8 STED | Floresan görüntüleme |
| Lipofektamin 2000 Reaktifi® | Termo Balıkçı | 11668019 | Transfeksiyon |
| LSRFortessa™ floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması | Bd | FACS LSRFortessa | Akış sitometrisi |
| Mikroplaka okuyucu | BioTek | KUTU 998 | ELISA analizi |
| Mikro spektrofotometre | Termo Balıkçı | Nano Bırak bir tane | Nükleik asit konsantrasyonu tespiti |
| NaCl (Doğal) | Sinopharm Kimyasal Reaktif | 10019308 | Kültür suyu |
| (NH4)2SO4 | Sinopharm Kimyasal Reaktif | 10002917 | Kültür suyu |
| Opti-MEM | Gibco (Gibco) | 31985088 | Hücre kültürü |
| Polietilen glikol 1500 | Roche Diagnostik | 10783641001 | Hücre füzyonu |
| PrimeScript™ 1. iplikli cDNA Sentez Kiti | Takara Biyografi | RR047 | qPCR (Kısmi Çözünürlük) |
| Protein A agaroz | Beyotime Biyoteknoloji | P2006 | Antikor proteini saflaştırması |
| Protino® Ni+-TED 2000 Paketli Kolonlar | MACHEREY-NAGEL | 745120.5 | Protein saflaştırma |
| SBA Klonotipleme Sistemi-HRP | Güney Biyoteknoloji | Mayıs-00 | Fare monoklonal antikorlarının izotiplenmesi |
| Dikişsiz Klonlama Kiti | Beyotime Biyoteknoloji | D7010S Serisi | Plazmitlerin yapımı |
| Şişeleri sallayın | Beyotime Biyoteknoloji | E3285 | Hücre kültürü |
| Sodyum karbonat-sodyum bikarbonat tamponu | Beyotime Biyoteknoloji | C0221A | Hücre kültürü |
| Trans-Blot SD Yarı Kuru Transfer Hücresi | Biyo-rad | 170-3940 | Batı lekesi |
| Tripton | Oksoit | LP0042 | Kültür suyu |
| Ultrasonik Homojenizatör | Ningbo Xinzhi Biyoteknoloji | JY92-IIN | Numune homojenizasyonu |
| Maya özü | Oksoit | LP0021 | Kültür suyu |
| 96 oyuklu mikroplaka | Corning | 3599 | Hücre kültürü |
