Antijene Özgü B Hücrelerinden Monoklonal Antikorlar Üretmek İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Devilder, M., et al. Kanda Dolaşan Nadir Antijene Özgü B Hücrelerinden Ayrımcı İnsan Monoklonal Antikorlarının Üretilmesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Video, antijene özgü B hücrelerinden monoklonal antikorlar üretmek için bir tekniği göstermektedir. İzole edilmiş antijene özgü B hücrelerinden klonlanan antikorların ağır ve hafif zincirlerini kodlayan ökaryotik ekspresyon vektörleri, polipleksler kullanılarak memeli hücrelerine sokulur. Hücrelerin içine girdikten sonra, bu vektörler translasyona uğrar ve elde edilen ağır ve hafif zincirli peptitler, daha sonra hücreler tarafından salgılanan antikorlara dönüşür.

Protokol

1. mAb üretimi

1. Transfeksiyondan bir gün önce, 15.000 İnsan embriyonik böbrek 293A (HEK 293A) hücresini, 96 oyuklu plakalarda oyuk başına% 10 FBS ile desteklenmiş 200 μL Dulbecco'nun modifiye Eagle besiyerinde (DMEM) tohumlayın. 37 ° C'de bir CO₂ inkübatöründe (% 5 CO₂) gece boyunca inkübe edin.
2. Transfeksiyon reaktifi olarak doğrusal bir polietilenimin türevi kullanılarak %10 FBS içeren DMEM ortamındaki Cotransfect 293A hücreleri.
   not: Transfeksiyonu üç nüsha halinde gerçekleştirin. Aşağıdaki protokol, düz tabanlı 96 oyuklu bir plakanın bir kuyusu içindir.
   1. 0.5 μL DNA transf....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
HEK 293A hücre hattı	Thermo Fisher bilimsel	R70507
DMEM (1X) Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı	Gibco by life technologies	21969-035	(+) 4,5g/L D-Glikoz 0,11g/L Sodyum Piruvat (-) L-Glutmin
Nutridoma-SP	Roche	11011375001	100X Konsantre
Fetal Sığır serumu (FBS)	Dominique Dutscher	S1810-500 Serisi
Jet PEI DNA transfeksiyon reaktifi	PolyPlus (PolyPlus)	101-40
Düz tabanlı96 oyuklu plaka	doğan	353072
V tabanlı 96 oyuklu plaka	Nunc/Termo Balık Avcısı	55142

Serisi