İmmünoglobulin G'nin Tespiti için Kağıt Tabanlı Bir İmmünoassay

Özet

Kaynak: Peng, Y. et al., Antikorların Selüloz Kağıt Disklere Kovalent Bağlanması ve Çıplak Gözle Kolorimetrik İmmünoanalizlerdeki Uygulamaları.J. Vis. Uzm. (2016)

Video, glutaraldehit ile çapraz bağlanmış amin ile işlevselleştirilmiş selüloz diskleri içeren kağıt bazlı bir immünolojik testi göstermektedir. IgG-Fc'ye özgü yakalama antikorlarının kovalent immobilizasyonu, ardından immünoglobulin G ve yaban turpu peroksidaz konjuge tespit antikorlarının eklenmesi, immünoglobulin G'nin varlığını doğrulayan bir renk değişikliği ile sonuçlanır.

Protokol

1. Amin Fonksiyonel Gruplarının Selüloz Kağıt Diskler Üzerine Aşılanması

1. 1 cm × 1 cm boyutlarında bir parça kare kağıt ve bir delgeç kullanarak 6,0 mm çapında 1 numaralı selüloz kağıttan (orta akışlı filtre kağıdı) yapılmış 100 kağıt disk hazırlayın.
2. Kağıt diskler üzerinde -NH₂ grupları elde etmek için çeker ocakta 50 ml'lik bir cam şişede 1 ml 3-aminopropiltrimetoksisilan (APS) ve 10 ml asetonu karıştırın. Taze hazırlanmış APS reaktif karışımına kağıt diskler ekleyin ve oda sıcaklığında orbital karıştırma (200 rpm) ile 5 saat inkübe edin.
   Dikkat: Çeker ocakta APS ve asetonu kullanın.

Sonuçlar

Şekil 1.İşlenmemiş ve APS ile işlenmiş orta akışlı filtre kare kağıdının (A) ve hızlı akışlı filtre kare kağıdının (B) Fourier dönüşümü kızılötesi (FTIR) spektrumları. Bir. İşlenmemiş orta akışlı filtre kare kağıdının spektrumları, APS ile işlenmiş orta akışlı filtre kare kağıdınınkine benzerdi. APS ile muamele edilmiş kare kağıt için 902-1.170 ^cm-1 ve 1.21.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Selüloz filtre kağıdı, Grade1 (orta akışlı filtre kağıdı)	GE Sağlık Ticaret A.Ş. Singapur	1001 110
Selüloz filtre kağıdı, Grade113 (Hızlı akışlı filtre kağıdı)	Sigma-Aldrich, Singapur	1113-320
3-Aminopropiltrimetoksisilan	Sigma-Aldrich, Singapur	T1255	>96%
Gluteraldehit	Sigma-Aldrich, Singapur	G6257	Derece II, H2O'da %25
Sığır serum albümü	Sigma-Aldrich, Singapur	A2153
Yağsız süt tozu	Louis François ·		Mutfak Kapari, Singapur tarafından paketlenmiştir
Tris tabanı	Promega	H5135
Sodyum periyoat	Merck	106597
Na2HPO4	Merck	106585
KH2PO4	Merck	104873
NaCl (Doğal)	CALBIOCHEM (CALBIOCHEM	567441
NaOH (NanoOH	Merck	106462
Hcl	Merck	100317
Fosfat tampon salin (PBS)	Yok	Yok	137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.0 mmol/L Na2HPO4 ve 1.5 mmol/L KH2PO4 içeren PBS, su ile hazırlanır ve 0.1 mol/L NaOH veya 0.1 mol/L HCl ile pH 7.4'e ayarlanır
aseton	Tee Hai Chem Ticaret Ticaret A.Ş.	9005-68
TMB ve hidrojen peroksit çözeltisi karışımı	1 Adımlı ultra TMB-ELISA çözümü, Thermo Scientific Pierce	34029	1 L
Afinite saflaştırılmış keçi anti-Fare IgG-Fc kaplama antikoru	Bethyl Laboratuvarları A.Ş	A90-131A
Fare referans serumu	Bethyl Laboratuvarları A.Ş	RS10-101-5	9.5 mg / mL
HRP konjuge keçi anti-fare IgG-Fc algılama antikoru	Bethyl Laboratuvarları A.Ş	A90-131P
ekipman
Fourier dönüşümü kızılötesi spektrofotometresi	Shimadzu Kızılötesi Prestij-21	Yok
fırın	NUVE FN500	Yok
Turbo karıştırıcı VM-2000	MYC LTD. ŞTİ.	Yok
Resim J	RGB, ücretsiz indirme	Yok

Serisi Serisi Serisi Fuar Serisi ) ) Singapur . Serisi . Serisi .