Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Monoklonal Antikorların Saflaştırılması için Bir Afinite Kromatografisi Tekniği

2.1K görüntülenme

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Elgundi, Z., et al. Terapötik Bir Antikorun Laboratuvar Ölçeğinde Üretimi ve Saflaştırılması. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, antikor üreten bir hücre kültüründen elde edilen kültür süpernatantından monoklonal antikorların saflaştırılması için bir tekniği göstermektedir. İşlem, boncuklar üzerindeki süpernatanttaki antikorları hareketsiz hale getiren ve kirleticilerden etkili bir şekilde ayrılmaya izin veren konjuge Protein A ile çapraz bağlı agaroz boncuklarından oluşan bir matrisin kullanılmasını içerir. Düşük pH'lı bir elüsyon tamponu uygulanarak, protein A-antikor etkileşimi gevşetilir ve antikor içeren fraksiyonların toplanmasını kolaylaştırır.

Protokol

1. Otomatik Hızlı Protein Sıvı Kromatografisi (FPLC) Sistemi Kullanılarak Afinite Kromatografisi ile Antikor Saflaştırması

>NOT: Aşağıdaki prosedür genellikle çoğu otomatik sisteme uygulanabilir. Saflaştırma oda sıcaklığında veya 4 °C'de yapılabilir (FPLC sistemi serin bir odada tutuluyorsa). Şartlandırılmış ortamdan saflaştırılmış antikorun maksimum geri kazanımını sağlamak için uygun kolon matrisi, bağlama tamponu, elüsyon tamponu ve pH dahil olmak üzere optimum saflaştırma koşullarını belirlemek için bir dizi keşif testi yapılabilir (Sonuçlar bölümüne bakın). Optimal koşullar, saflaştırılan antikor veya pro....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS) Tabletleri, pH 7.4, 100 ml09-2051-100Astral Bilimsel
HiTrap Protein A Yüksek Performanslı, 1 x 5 ml kolonGE17-0403-01Sigma-Aldrich
AKTAtemizleyici 10028406266GE SağlıkBir P-960 numune pompası ve Frac-920 fraksiyon toplayıcı içerebilen otomatik FPLC sistemi.
Glisin-HClG2879Sigma-Aldrich
Sitrik Asit, monohidratBIOC2123Astral Bilimsel
Sodyum Sitrat, trisodyum tuzu dihidratBIOCB0035Astral Bilimsel
1 M Tris-HCl çözeltisi pH 9.0BIOSD8146Astral Bilimsel
Amicon Ultra Santrifüj Filtreler (30 MWCO)UFC803008/UFC903008Merck KırlangıçSaflaştırılmış proteini tamponlamak, değiştirmek ve konsantre etmek için kullanılır.
Pierce Biskinkoninik Asit (BCA) Test Kiti23227Thermo Fisher Bilimsel
BLItz Sistemi45-5000fortéBIO (İngilizceBiyo-katman interferometrisi (BLI) ölçümleri için kullanılan cihaz.
Protein A biyosensörleri18-5010fortéBIO (İngilizce
Gazetesi Serisi Gazetesi arası ) )

Etiketler

Protein AAntikor Safla t rmaAgaroz BoncuklarEl syon TamponuBa lama TamponuFPLC SistemiUV AbsorbansSantrif j Filtresi