Method Article

Proteinlerin hücre altı lokalizasyonunu görselleştirmek için bir immünoetiketleme tekniği

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Aishwarya, R., et al. Kuantum Nokta Aracılı İmmüno-Etiketleme ve Ardından Transmisyon Elektron Mikroskobu Kullanılarak Kalpteki Bir Proteinin Hücre Altı Lokalizasyonunun Görselleştirilmesi. (2022).

Bu video, kuantum noktaları kullanılarak bir murin kalp dokusu bölümündeki sigma-1 reseptörlerinin immüno-etiketlenmesi için bir tekniği göstermektedir. Kalp dokusu sabitlenir, osmiklenir, boyanır, kurutulur, reçineye gömülür ve daha sonra kesilir. Kesitler daha sonra antikorlarla muamele edilir ve elektron mikroskobu kullanılarak Sigma-1 reseptörlerinin hücre altı lokalizasyonunu sınırlamak için kuantum noktaları ile etiketlenir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hayvan hazırlama

  1. % 3 izofluran kullanarak fareleri uyuşturun. Orta karnın üzerindeki bölgede yatay bir kesi yaparak ve cildi çekerek göğsü açın. Başka organları delmeden göğüs boşluğunu açmak için dikkatlice başka bir kesi yapın.
    1. Tam miyokardiyal gevşeme sağlamak için kardiyoplejik solüsyonda (50 mM KCl, PBS'de %5 dekstroz, bkz. Tablo 1) soğuk %3 glutaraldehit kullanarak kalbi önce apeksten ve ardından sağ ventrikülden 2 dakika boyunca perfüze edin.
  2. 0,1 M sodyum kakodilat tamponunda (pH 7,4) buz gibi %3 glutaraldehit kullanarak kalbi 2 dakika daha perfüze edin. Yerçekimi basıncını kul....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
200 Mesh bakır ızgaraTed Pella'nın fotoğrafı.G200HH
FVB/N arka planı olan 6 aylık erkek farelerJackson Laboratuvarı, Bar Limanı, ME
Aseton %100Fisher KimyasallarıA949
Antikor seyrelticiDako BelediyesiS3022 Serisi
anti-Sigmar1 antikoruHücre Sinyalizasyonu61994S
Biyotinile keçi anti-tavşan IgG antikoruSigma AldrichB7389
Lisans (%10)Elektron Mikroskobu Bilimleri25557
Kalsiyum klorürSigma AldrichC7902
Sitoseal XylTermo balıkçı8312-4
DER 732C36AA10:C33Elektron Mikroskobu Bilimleri13010
DekstrozSigma AldrichG7528
Elmas BıçakDiyatomHisto; Ultra 450
DMAE (DMAE)Elektron Mikroskobu Bilimleri13300
Elektron mikroskobuJEOLJEOL-1400 Flaş
ERL 4221Elektron Mikroskobu Bilimleri15004
Etanol 100%Fisher KimyasallarıA405P
Gluteraldehit %3Elektron Mikroskobu Bilimleri16538-15
glisinAlfa AesarA13816
hidroklorik asitBalıkçı BilimselSA56
Mikro kalıplarTed Pella'nın fotoğrafı.10505
MikrotomLeica Mikro SistemEM UC7
Normal keçi serumuCanlandırıcıPCN5000
NsaElektron Mikroskobu Bilimleri19050
Osmiyum tetroksitElektron Mikroskobu Bilimleri19150
Parafilm FilmiGenesse Bilimsel16-101
Potasyum KlorürSigma AldrichP5655 Serisi
Potasyum Fosfat monobazikSigma Aldrich71640
Qdot 655 Streptavidin KonjugatıCanlandırıcıQ10121MP
Sodyum AsetatBalıkçı BilimselBP334
Sodyum KakodilatElektron Mikroskobu Bilimleri12300
Sodyum KlorürBalıkçı BilimselBP358
Sodyum metaperiodatSigma Aldrich71859
Sodyum Fosfat dibazikSigma AldrichP9541 Serisi
Cerrahi bıçak (10 numara)Aspen cerrahi371110
TEM imaj yazılımıAMT-V700AMT TEM görüntüleme sistemleri
TEM görüntüleme kamerasıXR80 TEM serisiAMT TEM görüntüleme sistemleri
Toluidin Mavi O çözeltisi (% 0.5)Balıkçı BilimselS25612 Serisi
Uranil asetatPoli Bilimler21447
Serisi · Serisi · Serisi (İngilizce) · Serisi Serisi Adet Serisi Teknolojisi Serisi Serisi Adet Haber Bülteni arası · · Serisi Serisi · · Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Immunolabeling TechniqueSubcellular LocalizationQuantum DotsTransmission Electron MicroscopySigma 1 ReceptorsHeart Tissue SectionPrimary AntibodiesBiotinylated Secondary AntibodiesStreptavidin Conjugated QDSodium Cacodylate Buffer

Related Articles