Method Article

Antikorların Özgüllük Profili için Bir Peptit Mikroarray Teknolojisi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Cornett, E. M., et al. Peptit Mikrodizileri ile Histon Antikor Özgüllüğünün Analizi. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, histon peptitleri üzerindeki translasyon sonrası modifikasyonları (PTM'ler) tanıyan antikorların özgüllüğünü profillemek için peptit mikrodizi teknolojisini uygulayan bir tekniği göstermektedir. Bilinen PTM kombinasyonlarına sahip hareketsizleştirilmiş florofor konjuge histon peptitleri içeren bir mikrodizi slaytı, hedef PTM'ye özgü antikorlarla muamele edilir. Bu işlem, antikorun hedef için özgüllüğünü ve hedef olmayan PTM'lerle potansiyel çapraz reaktivitesini tanımlamaya yardımcı olur.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Dizi Slaytını ve Kaynak Plakası Düzenini Tasarlama

  1. ArrayNinja arayüzündeki 'Bir slayt düzeni planla' başlığı altında, kullanılan mikrodizi yazıcıya karşılık gelen bağlantıya tıklayın.
    not: ArrayNinja, yaygın olarak kullanılan iki mikrodizi yazıcının robotik hareketini taklit edecek şekilde programlanmıştır (bkz. Tablo 1). Diğer arrayer'larla uyumluluk, istek üzerine yapılandırılabilir.
  2. 'Yük plakası' iletişim kutusunun içine tıklayın, "boş" yazın ve 'enter'a tıklayın. ArrayNinja tasarım modülünün ekran görüntüsü için Şekil 1'e bakın.
  3. Spot çapını 275 μm ve spot ar....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: ArrayNinja Tasarım Modülü. ArrayNinja tasarım modülünün ekran görüntüsü noktalı çizgide gösterilir. Kontrol paneli (üstte), mikrodizi yazıcıda değiştirilebilecek tüm parametreleri gösterir. Bu parametreler ayarlandıkça, slayt düzeninin çizgi film görüntüsü (sol altta) gerçek zamanlı olarak güncellenir. Düzen ayarlandıktan sonra, kullanıcı benzersiz özellik tanımlayıcılarını girmek için fareyi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Yazdırma TamponuDizi BilişimiPpb
BsaHer şeyi saf2390
Streptavidin kaplı cam mikroskop slaytlarıGreiner Biyo-bir439003-25
polipropilen 384 kuyulu plakaGreiner Biyo-bir784201
Biyotin-floreseinSigma53608
Mikrodizi Yazıcı ile İletişime GeçinAvuston2470Aushon 2470 Mikrodizi Yazıcı
Mikrodizi Yazıcı ile İletişime GeçinGen MakineleriÇok Amaçlı Izgara 100OmniGrid Mikrodizi Yazıcı
PbsCanlandırıcı14190
Engelleme TamponuDizi BilişimiSBB (Sb)
Hidrofobik balmumu kalemiVektör LaboratuvarlarıH-4000ImmEdge Hidrofobik Bariyer PAP Kalemi
Silikon ContaGrace Biyo-laboratuvarları622511
Hibridizasyon KabıTermo Bilimsel267061veya benzeri bir gemi
Floresan boya konjuge sekonder antikorYaşam TeknolojileriA-21244Alexa Fluor 647 (tavşan karşıtı)
Floresan boya konjuge sekonder antikorYaşam TeknolojileriA-21235Alexa Fluor 647 (fare karşıtı)
Balmumu YazıcıDizi BilişimiMSI48
Ara-20Her şeyi saf9490
Mikroarray TarayıcıMasumlarInnoScan 1100ALveya eşdeğer mikrodizi tarayıcı
EipTitan Histon Peptit Mikrodizisiepistik112001
AbSurance Pro Histon Peptit MikrodizisiKırlangıç16668
MODİFİYE EDİLMİŞ HİSTON PEPTİT DIZISIAktif Motif13001
Histon Kodu Peptit MikrodizileriJaponyaHis_MA_01
balmumuKraliyet MeşeKörfez Balmumubalmumu imprinter için
Nemlendirilmiş Mikroarray Slayt Hibridizasyon OdasıVWR (VWR)97000-284
Yüksek verimli mikroskop slayt yıkama odasıDizi BilişimiHTW (Türkçe)
Mikroskop slayt santrifüjüVWR (VWR)93000-204
Antikor 1Abcam Belediyesi8898
Antikor 2Kırlangıç07-473
Biyotinile histon peptitEpiCypher (EpiCypher)12-2001Örnek peptit. Çeşitli modifikasyonlara sahip benzer peptitler, çeşitli ticari kaynaklardan temin edilebilir.
Görüntü Büyüsühttps://www.imagemagick.org/script/index.php
Dizi Ninjahttps://rothbartlab.vai.org/tools/
adet adet Serisi Serisi Serisi Serisi Adet arası

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

Related Articles