Zebra Balığı Radyal Glia Progenitörlerinde Çentik/DeltaD Sinyalini Görüntülemek için Bir Antikor Alım Testi

Özet

Kaynak: Zhao, X. ve diğerleri, Zebra Balığı Radyal Glia Progenitörlerinin Asimetrik Bölünmesi Sırasında Çentik/Delta Endositozunu İzlemek İçin Antikor Alım Testi.J. Vis. Uzm. (2023)

Bu video, zebra balığı radyal glia progenitörlerinde Notch/DeltaD sinyalini görüntülemek için bir antikor alım testini göstermektedir. Agaroza gömülü dekoryonlu zebra balığı embriyolarının monte edilmesini, RGP'ler üzerinde DeltaD ligandlarını hedefleyen bir boya çözeltisinin enjekte edilmesini ve Notch / DeltaD sinyal aktivasyonunu doğrulayan asimetrik hücre bölünmesi için bir floresan mikroskobu altında görüntülemeyi içerir.

Protokol

1. Zebra balığı embriyolarının hazırlanması

1. Öğleden sonra saat 17:00'den önce, bir dişi vahşi tip balık ve bir erkek Tg [ef1a:Myr-Tdtomato] balığı ile her tankta ayırmak için bölücüler kullanarak balık geçiş tankları kurun.
2. Ertesi sabah saat 11:00'den önce bölücüleri tüm geçiş tanklarından çıkarın. Sessiz olun ve çiftleşirken balıkları rahatsız etmeyin. Yumurtlama tipik olarak bölücüler çıkarıldıktan sonra 30 dakika içinde gerçekleşir. Döllenmiş yumurtalar tankın dibinde kalır.
   1. Döllenmiş yumurtaları tanklardan bir ağ filtresi ile toplayın. Yumurtaları yıkayarak yumurta suyuyla dolu bir Petri kabına aktarın ve....

Sonuçlar

Şekil 1: Deneysel adımların akış şeması.MyR-Tdtomato muhabirini ifade eden transgenik zebra balığı, 1. günde AB vahşi türü ile çaprazlanır. 2. günde, mikroenjeksiyon için kırmızı floresan embriyolar seçilir ve ardından zaman atlamalı görüntüleme yapılır. 2^. gündeki tüm deney yaklaşık 8 saat sürer.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
35 mm cam alt kültür kabı	MatTek şirketi	P35GC-1.5-10-C
Hava basıncı enjektörü	Narishige (Narishig)	IM300 Serisi
Anti-Fare-IgG-Atto647N	Sigma-Aldrich	50185
CaCl2.2H2O	Sigma-Aldrich	C3306
Kılcal damarlar, 1,2 mm dış çap, 0,9 mm iç çap, filamentli	Dünya Hassas Aletler	1B120F-6
CSU-W1 İplik Diski/Yüksek Hızlı Geniş Alan	Nikin Belediyesi	Yok	Nikon Ti ters floresan mikroskobu, CSU-W1 geniş görüş alanına sahip konfokal.
Dumont Medikal Cımbız Stil 5	Thomas Bilimsel	72877-D
Alevli-Kahverengi P897 çektirme	Sutter Aletleri	Yok	https://www.sutter.com/manuals/P-97-INT_OpMan.pdf
Kartal	Kırlangıç	529552
MgSO4.7H2O	Sigma-Aldrich	M2773 Serisi
Mikromanipülatörler	Dünya Hassas Aletler	WPI M3301R
Fare anti-Dld	Abcam Belediyesi	AB_1268496
Zenon'dan fare IgG engelleme tamponu	Thermofisher Bilimsel	Z25008
NaCl (Doğal)	Sigma-Aldrich	S3014 Serisi
Fenol kırmızısı	Sigma-Aldrich	P0290 Serisi
Stemi 2000	Zeiss	Yok
Trikain	Sigma-Aldrich	E10521
UltraPureTM düşük erime noktalı agaroz	Canlandırıcı	16520050

Gazetesi Gazetesi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi · Gazetesi Serisi