$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Çalışma grubunun temel bilgileri
>NOT: Devlet Anahtar Solunum Hastalıkları Laboratuvarı'nın (AIR-SKLRD) Alerji Bilgi Deposu, Guangzhou Solunum Hastanesi Enstitüsü (GIRH) içinde kurulmuş büyük bir serum bankasıdır. Son on yılda başlatılan AIR-SKLRD, alerjik hastalıkları olan hastalardan serum örneklerini ve klinik bilgilerini toplamaya ve saklamaya başlamıştır (Tablo 1). Bu çalışma AIR-SKLRD'den sera ile gerçekleştirilmiştir.
- Ocak 2015'ten Haziran 2018'e kadar toplanan serumlar için AIR-SKLRD'nin veritabanında arama yapın ve bölgedeki yaygın alerjenlere duyarlı olduğu tespit edilen alerjik hastalığı olan hastaları seçin.
- Seçilen tüm hastaların alerjik rinit ve/veya astım, alerjik dermatit ve/veya ürtiker gibi alerjik ilişkili hastalıklara sahip olduğundan ve bu hastaların serumunun, Sistem 1 tarafından tespit edilen, bu bölgedeki yaygın alerjenlerin çoklu serum alerjenine özgü immünoglobulin E (sIgE) duyarlılıklarını içerdiğinden emin olun.
- Eksik tıbbi kayıtları olan hastaları, takip için kaybedilenleri, serum örneklerinin bilimsel amaçlarla kullanımı konusunda bilgilendirilmiş onam vermeyi reddedenleri, tanımlanmış bir immün yetmezliği olanları, şu anda immünoterapi veya immünomodülatör ajanlar kullananları veya paraziter enfeksiyonları olduğu tespit edilenleri hariç tutun.
- Laboratuvar bulgularına müdahaleyi en aza indirmek için serum alımından önce herhangi bir tedavi veya ilaç reçetesi verilmediğinden emin olun. Kriterleri karşılamayan tüm serum örnekleri reddedildi.
2. Çalışma akışı ve ilgilenilen ölçümler
>NOT: Mikroakışkan sistemin 19 alerjeni belirlemek için 100 μL seruma ihtiyacı vardır. Her hastadan ayırıcı jel içeren vakumlu kan damarı kullanılarak venöz kan (5 mL) toplandı. 1.000 x g'da 10 dakika santrifüjlendikten sonra, üst tabaka test için toplandı. Kullanılmayan serum -80 °C'de saklandı. Testten önce, serum 30 dakika oda sıcaklığında tutuldu ve bir girdap karıştırıcı ile çalkalandı. Tekrarlanan donma ve çözülme döngülerinden kaçınıldı.
- Öncelikle serum örneklerini Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), kedi kepeği (e1), köpek tüyü (e5), Bermuda otu (g2), timothy otu (g6), hamamböceği (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans alerjenlerine karşı sIgEs için test edin(M5), kanarya otu (W1), yumurta akı (F1), süt (F2), buğday (F4), yer fıstığı (F13), soya fasulyesi (F14), badem (F20), yengeç (F23) ve karides (F24). Bölüm 3.
'da verilen talimatları izleyin
NOT: sIgE tayini, alerjene özgü IgE tahlil kiti ile yapılmıştır (Malzeme Tablosuna bakınız) ve bir kemilüminesans analizörü ile ölçülmüştür.
- Tekrarlanabilirlik çalışması için yeterli seruma (en az 900 μL) sahip örnekler arasından rastgele üç örnek seçin. Tüm koşulları değiştirmeden tutarak, art arda 9 gün boyunca günlük olarak alerjen sIgE için üç serumu ölçün (ör., 100 x 9 = 900 μL serum).
3. Mikroakışkan sistemin yarı otomasyon test prosedürü
>NOT: Sistem 2, otomatik mikroakışkan teknolojisini, protein mikrodizisini, soğuk ışık analizini, paralel IgE analizini ve görüntü işleme teknolojisini entegre eder. Test protokolü dört bölüme ayrılmıştır: ekipmanın hazırlanması, numune yükleme, inkübasyon ve ölçüm.
- Ekipmanın hazırlanması
- PC'yi ve analizörü açın güç.
not: Güç anahtarı tabanın solundadır.
- PC'de LabIT programını başlatın. Dark Frame uyarı penceresi açılırsa, LEAK Test'i çalıştırmak için OK (Tamam) düğmesini tıklayın. Daha sonra, işlem arayüzüne girmek için ortadaki logoya tıklayın.
not: Sistem, 24 saatten fazla boşta kalması durumunda kullanıcıya SIZINTI Testini çalıştırmasını hatırlatacaktır.
- Ekranın sağ alt köşesindeki Reaksiyon Sıcaklığını ve CCD (şarj bağlantılı cihaz) Sıcaklığını kontrol edin. Reaksiyon Sıcaklığı yaklaşık 10 dakika içinde 37 °C ± 1 °C'ye yükselmeli ve CCD Sıcaklığı 1 °C ± -15 °C'ye düşmelidir.
- CCD Sıcaklığı -15 °C ± 1 °C'ye düştükten sonra SIZINTI Testini çalıştırın. SIZINTI testini çalıştırmadan önce, cihazın içinde başka hiçbir eşya kalmadığından emin olun ve kapıyı kapatın. Araçlar | Sistem Testi | SIZINTI Testi'ne tıklayın. Test sırasında kapıyı açmayın. Test bittiğinde, rapor penceresi açılacaktır.
- Numune yükleme
- Mikroakışkan kartuş üzerindeki ilgili reaktif tankına 620 μL yıkama tamponu, 120 μL bloke edici tampon, 60 μL konjuge A ve B, 60 μL substrat A ve B ve 100 μL serum numunesi ekleyin.
- Kuluçka
- Kartuş Kimliği'ne tıklayın, kartuşun seri numarasını taramak için barkod tarayıcıyı kullanın, numune kimliğini girin, kartuşu analizöre koyun, kapıyı kapatın ve analizi başlatmak için Analizör ve Çalıştır'a tıklayın.
- ölçüm
- Ölçümden sonra sonuçları istatistiksel yazılıma (örneğin, Excel) aktarın.
NOT: 30 dakikalık inkübasyondan sonra, analizör ölçümü otomatik olarak gerçekleştirir ve sonucu raporlar.
Tablo 1: Hastaların demografik özellikleri. Toplamda, dahil etme kriterlerini karşılayan 293 denek bulundu ve ortanca yaş 23 idi (çeyrekler arası aralık 8 ila 36 yaş arası). Olguların 170'i (%58,02) erkek, 123'ü (%41,98) kadındı. Hastaların 92'sinde (%31.40) alerjik rinit, 117'sinde (%39.93) alerjik astım, 36'sında (%12.29) rinit ve astım birlikteliği, 48'inde (%16.38) besin alerjisi veya deri alerjisi gibi diğer alerjik hastalıklar mevcuttu.
arası
arası
| özellik | Hayır.( %) |
| Cinsiyet, n(%) | |
| dişi | 123 (%41.98) |
| erkek | 170 (%58.02) |
| Yaş, yıl, n(%) | |
| Medyan (%25,%75) | 23(8,36) |
| ≤10 | 97 (%33.11) |
| 11-20 | 37 (%12.63) |
| 21-40 | 101 (% 34.47) |
| >41 | 58 (%19.80) |
| Tanı, n(%) | |
| Alerjik rinit | 92 (%31.40) |
| Alerjik astım | 117 (%39.93) |
| Astımlı alerjik rinit | 36 (%12.29) |
| Diğer | 48 (%16.38) |