Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
1K görüntülenme
⸱
8 Temmuz 2025
Kaynak: Fang, E. F., et al. İnsan Hücrelerinde Mitofajinin İn Vitro ve İn Vivo Tespiti, C. Elegans ve Fareler. J. Vis. Exp. (2017).
Bu video, Caenorhabditis elegans'ta mitofajiyi incelemek için in vivo bir testi göstermektedir. Nematodları mitofajiyi indükleyen bir ilaca maruz bıraktıktan sonra, mitofaji oluşumu, hasarlı mitokondri üzerindeki bir mitofaji reseptörü olan DCT-1 ile otofagozomal membran proteini LGG-1 arasındaki ko-lokalizasyon ile değerlendirilir.
1. C. elegans'ta Mitofajinin Tespiti
NOT: Nematod C. elegans, organizma düzeyinde mitofajiyi test etmek için bir platform sağlar. Mitofajiyi izlemek için iki suş kullanılabilir: (1) mitokondri hedefli Rosella (mtRosella) veya (2) Discosoma sp ile kaynaşmış otofagozomal belirteç LGG-1 ile birlikte GFP ile kaynaşmış mitofaji reseptörü DCT-1. kırmızı floresan proteini (DsRed).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Eclipse TE-2000e konfokal mikroskop | Nikon | #TE-2000E | |
| Yerelleştirme yazılımı | Hacim | #Volocity 6.3 | alternatif Zeiss ZEN 2012 yazılımı |
| IN Hücre Araştırmacı Yazılımı | GE Sağlık Yaşam Bilimleri | #28408974 | |
| Hücre Kültürü Ortamı | Termo Balıkçı | #DMEM–Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Kartal Ortamı | |
| Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL) | Termo Balıkçı | #15140122 | |
| Fetal Sığır Serumu | Sigma-Aldrich | #12003C-1000ML | |
| Hücre kültürü İnkübatörü | Termo Balıkçı | #Thermo Forma 3110 CO2 Su Ceketli İnkübatör | |
| epifloresan mikroskobu | Zeiss | Zeiss Axio Görüntüleyici Z2 | |
| kamera | Olympus | Olympus DP71 | |
| konfokal mikroskop | Zeiss | Zeiss Axio Gözlemci Z1 | |
| Konfokal Yazılım | Zeiss | ZEN 2012 | |
| Görüntü Analiz Yazılımı | Resim J | kolokalizasyon analizi, vb | https://imagej.nih.gov/ij/ |
| İstatistiksel Analiz Yazılımı | GraphPad Yazılım A.Ş., San Diego, ABD | GraphPad Prism yazılım paketi | |
| Solucan seçimi yapmak için malzeme | Surepure Kemetaller | #4655 | Seçim 30 gauge %90 platin %10 iridyum telden yapılmıştır |
| IR: N2; Eski[pmyo-3 TOMM-20::Rosella] | Tavernarakis Nektarios'a malzeme talebi | Transgenik hayvanları 20 °C'de koruyun | |
| IR: N2; Ör[pdct-1 DCT-1::GFP; pmyo-3 DsRed::LGG-1] | Tavernarakis Nektarios'a malzeme talebi | ||
| pmyo-3 TOMM-20::Rosella | Tavernarakis Nektarios'a malzeme talebi | ||
| pdct-1 DCT-1::GFP | Tavernarakis Nektarios'a malzeme talebi | ||
| pmyo-3 DsRed::LGG-1 | Tavernarakis Nektarios'a malzeme talebi | ||
| Paraquat çözümü | |||
| M9 tamponu | |||
| M9-levamisol tamponu | |||
| Cam Mikroskop Slaytları ve Lamelleri | Balıkçı Bilimsel | #B9992000 | |
| Cerrahi forseps | STERİS Hayvan Sağlığı | 19 Parça Köpek Kısırlaştırma Paketi Ekonomi | |
| Cerrahi makas | STERİS Hayvan Sağlığı | 19 Parça Köpek Kısırlaştırma Paketi Ekonomi | |
| 1 adet PBS | Termo Balıkçı | #AM9625 | 10x PBS'nin ddH2O kullanılarak 1x PBS'ye seyreltilmesi gerekir |
| Shaker | Balıkçı Bilimsel | # 11-676-178 | Thermo Scientific MaxQ HP Masaüstü Orbital Küçük Açık Hava Platform Çalkalayıcı Paketi A |
| % 2 agaroz pedi | |||
| Vibroslice bıçakları | Dünya hassas enstrümanlar | #BLADES-2 | Tek kenarlı bıçak |
| metal plaka | Msc | #78803988 | 0.012 inç kalınlık x 6 inç genişlik x 12 inç uzunluğunda, 430 Paslanmaz Çelik Sac |
| Triton X-100 | deterjan | ||
| Metil violojen diklorür hidrat | Sigma-Aldrich | #856177 | parakuat |
| Nematodlar için kuluçka makinesi | SU HAYATI | 20 °C'yi korumak için inkübatör | |
| Diseksiyon stereomikroskopu | Olympus | SMZ645 | |
| Konfokal mikroskop | Zeiss | AxioGözlemci Z1 | Nematodlar için (aşama 2) |
| epifloresan mikroskobu | Zeiss | AxioImager Z2 | Nematodlar için (aşama 2) |
| UV çapraz bağlayıcı | Vilber Lourmat | BIYO-BAĞLANTI – BLX-E365 | UV ışık kaynağı; 356 nm |
