Method Article

Aynı Konak Türlerden Primer Antikorların Kullanıldığı Bir Multipleks İmmün Boyama Yöntemi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Lyu, Q., et al. Aynı Konakçı Türlerden Konjuge Olmayan Primer Antikorlar Kullanılarak Fare Adrenallerinde Multipleks İmmün Boyama için Mikrodalga ve Florofor-Tiramid Kullanımı. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu video, aynı konakçı türden birincil antikorları kullanarak multipleks immün boyama gerçekleştirmek için bir testi göstermektedir. Bu yöntemde, bir adrenal doku bölümü iki aşamalı bir immün boyama işlemine tabi tutulur. Başlangıçta, kesit korteksteki belirteçler için spesifik antikorlarla boyanır, ardından bağlı antikor çıkarılır ve medulladaki belirteçler için spesifik antikorlarla yeniden boyanır.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. İlk Antikor ile Boyama

  1. Aşağıdaki adımların her birine 5 dakika ayrılarak formalinle sabitlenmiş parafine gömülü (FFPE) slaytları mumdan arındırın ve yeniden sulandırın: ksilen veya eşdeğer reaktifler 3x, %100 etanol 2x, %95 etanol 1x, %70 etanol 1x, %50 etanol 1x ve damıtılmış su 2x.
    not: Slaytlar, bu rehidrasyon adımından başlayarak son adımdaki montaja kadar nemli kalmalıdır.
  2. İsteğe bağlı antijen alımı için, slaytları 8 dakika boyunca 275 mL kaynar sodyum sitrat çözelti....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Antifade Montaj OrtamıVektör LaboratuvarlarıH-1000
Biyotinile eşek anti-fareJackson İmmün715-066-1511:500 seyreltme
Biyotinile eşek anti-tavşanJackson İmmün711-066-1521:500 seyreltme
DAPI (DAPIBiyo Efsane422801Damıtılmış suda 2 μg/mL
Floresan mikroskobuyankıDöndürmek 4
Yaban turpu peroksidaz konjuge streptavidinJackson İmmün016-030-0841:1000 seyreltme
Mikrodalga fırın, 700WGeneral Electric (Türkçe)JEM3072DH1BB
Fare anti-CYP2F2Santa Cruz,SC-3745401:250 seyreltme
Fare anti-THSanta Cruz,SC-252691:1000 seyreltme
Normal eşek serumuJackson İmmün017-000-121PBST'de% 2 serum
Tavşan anti-20αHSDKerafast,EB40021:500 seyreltme
Tavşan anti-3βHSDTransGenik,KO6071:250 seyreltme
Tavşan anti-THNovusNB300-1091:1000 seyreltme
Tavşan anti-β-kateninAbcam,AB325721:500 seyreltme
Streptavidin Yaban Turpu Peroksidaz (SA-HRP)Jackson İmmün016-303-0841:1000 seyreltme
TSA Cy3 TiramidPerkinElmerSAT704B001EA1:100 seyreltme
TSA Floresein TiramidPerkinElmerSAT701001EA1:100 seyreltme
Serisi ) Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

Related Articles