Bu videoda, aspirin ve ibuprofen'in minimum inhibitör konsantrasyonlarında, pH'a duyarlı floresan boya lekeli mantar hücreleri kullanılarak makrofaj fagositozu üzerindeki etkisini değerlendirmek için bir yöntem gösterilmektedir. İlaçlar, pH'a duyarlı boyanın floresan ölçümlerinde gözlemlendiği gibi, siklooksijenaz-2'yi inhibe eder, prostaglandin oluşumunu azaltır ve makrofaj fagositozunu artırır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Aspirin ve İbuprofen'in Makrofajların Fagositik Yeteneği Üzerine Etkisi
1.2K görüntülenme
⸱
23 Aralık 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
1. Güvenlikle ilgili hususlar
- Personel kişisel koruyucu ekipman (KKD) kullanmalıdır.
- Patojen ve makrofajları Sınıf II Biyolojik güvenlik kabininde kullanın.
2. Makrofajların hazırlanması
- 20 mg / mL streptomisin, 2 mM L-glutamin, 20 U / mL penisilin ve% 10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş 10 mL Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640) ortamı içeren bir doku şişesinde bir murin makrofaj hücre hattı olan RAW 264.7'yi yetiştirin.
- Şişeyi, %80 birleşme elde edilene kadar 37°C'ye ayarlanmış %5 karbondioksit (CO2) inkübatöre yerleştirin.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ağar | Merck | YM plakalarını hazırlamak için kullanılır | |
| Maya özü | Merck | YM plakalarını hazırlamak için kullanılır | |
| Malt özü | Merck | YM plakalarını hazırlamak için kullanılır | |
| Pepton | Merck | YM plakalarını hazırlamak için kullanılır | |
| Maya Azot Baz (YNB) | Difco Laboratuvarları | Kriptokok hücrelerinin yetiştirilmesinde kullanılır | |
| glikoz | Merck | YM plakalarını hazırlamak için kullanılır | |
| Tripan mavisi leke | Sigma-Aldrich | Canlı ve ölü hücreleri saymak için | |
| Fosfat tampon çözeltisi (PBS) | Sigma-Aldrich | Hücreleri yıkayın ve seyreltin | |
| RPMI- 1640 orta | Biyokrom | Makrofajlar için yetiştirme ortamı | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Biyokrom | RPMI-1640 ortamını desteklemek için kullanılır | |
| Penisilin / Streptomisin / L-glutamin | Sigma-Aldrich | RPMI-1640 ortamına eklendi | |
| pHrodo yeşil zymosan A lekesi | Yaşam Teknolojileri | PH'daki bir değişiklik nedeniyle içselleştirilmiş hücreleri boyamak için kullanılır | |
| Asetilsalisilik asit (Aspirin) | Sigma-Aldrich | Test edilecek ilaç | |
| Mutlak etanol | Merk | Aspirini çözmek için kullanılır | |
| Ibuprofen | Sigma-Aldrich | Test edilecek ilaç | |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Merk | İbuprofen'i çözmek için kullanılır | |
| 96 oyuklu düz tabanlı mikrotitre plakaları | Greiner Bio-Bir | İçinde reaksiyonların meydana geldiği bir kap olarak kullanılır | |
| Mendil şişesi | Lasec (Türkçe | Makrofajları yetiştirmek için kullanılır | |
| 15 mL santrifüj tüpü | Lasec (Türkçe | Makrofajları tutmak için kullanılır | |
| Hücre sıyırıcı | Lasec (Türkçe | Makrofajları doku şişesinden ayırmak için kullanılır | |
| Aşılama döngüsü | Lasec (Türkçe | Agar plakasına kültür sürmek için kullanılır | |
| Hemositometre | Marienfield Belediyesi | Makrofajların hücre konsantrasyonunu belirlemek | |
| 1,5 mL plastik tüpler | Merck | İçinde reaksiyonların meydana geldiği bir kap olarak kullanılır | |
| EZ Read 800 Araştırma spektrofotometresi | Biyokrom | Optik yoğunluğu okumak için | |
| Floroskan Tırmanışı FL | Termo-Bilimsel | Floresan ölçmek için | |
| CO2 kuluçka makinesi | Termo-Balıkçı | Makrofajları inkübe etmek için kullanılır | |
| Sınıf II biyolojik güvenlik kabini | ESCO (Öncü Kuruluş) | Kullanıcıya zarar vermeden patojenlerle güvenli bir şekilde çalışmak. |
