Boya Etiketli Manyetik Mikroküreler Kullanılarak Çoklanmış Kantitatif Bakteri Tespiti

Abstract

Bu video, farklı kümelere boyanmış karboksilatlı manyetik polistiren mikroküreler kullanan çoğullanmış kantitatif bakteri tespitini göstermektedir. Prosedür, boncuk-bakteri komplekslerinin oluşumunu, manyetik ayırmayı ve akış tabanlı analizi kapsar ve aynı reaksiyon kuyusunda birden fazla bakterinin hassas ve aynı anda miktar tayinini sağlar.

Protocol

1. Yakalama Antikorlarının MagPlex Mikrokürelerine Kovalent Eşleşmesi

Her yakalama antikoru, aşağıda açıklandığı gibi iki aşamalı bir prosedür kullanılarak belirli bir karboksilatlı manyetik mikroküre setine konjuge edilir.

>NOT: Mikroküre birleştirme için gerekli tüm reaktifleri, tamponları ve malzemeleri içeren bir birleştirme kiti de mevcuttur (bkz.

1. Stok bağlantısız mikroküre süspansiyonunu, microspheres.
   ile birlikte verilen ürün bilgi sayfasında açıklanan talimatlara göre yeniden askıya alın not: Yeniden askıya alma talima....

Results

Şekil 1: Çoğullanmış yakalama sandviç immünoassay iş akışı. Her bir oyuğa antikorla bağlı mikrokürelerin çoğullanmış bir karışımı dağıtılır ve numune eklenir. 1 saat inkübasyondan sonra, reaksiyonlar yıkanır ve biyotinile tespit antikorları eklenir. 1 saatlik bir inkübasyondan sonra, reaksiyonlar tekrar yıkanır ve SAPE raportörü eklenir. Reaksiyonlar 30 dakika inkübe edilir, yıkanır v.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MagPlex Mikro Küreler®	Luminex® Teknolojisi	MC100xx-YY	Bireysel katalog numaraları için web sitesine bakın (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order)
1,5 mL mikrosantrifüj tüpleri	Eppendorf™ Belediyesi	22431081	Protein LoBind®
0,1 M monobazik sodyum fosfat (NaH2PO4), pH 6,2	MilliporeSigma	S3139 Serisi	Aktivasyon tamponu
1-Etil-3 - [3-dimetilaminopropil] karbodiimid hidroklorür (EDC)	Termo Bilimsel™	Delmek™ 77149
N-hidroksisülfosüksinimid (Sülfo-NHS)	Termo Bilimsel ™	Pierce™ 24510
Fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4	MilliporeSigma	P3813 Serisi	Kaplin tamponu
xMAP® Antikor Birleştirme Kiti	Luminex® Teknolojisi	40-50016	Mikroküre bağlantısı için isteğe bağlı kit mevcuttur.
Anti-Escherichia coli O157:H7 antikoru	Sera Bakımı	5310-0326	Poliklonal, hem yakalama hem de algılama için kullanılır
Anti-Salmonella CSA-Plus antikoru	Sera Bakımı	5310-0321	Poliklonal, hem yakalama hem de algılama için kullanılır
Anti-Campylobacter spp. antikoru	Sera Bakımı	5310-0324	Poliklonal, hem yakalama hem de algılama için kullanılır
Anti-Listeria antikoru	Sera Bakımı	5310-0319	Poliklonal, cinse özgü, hem yakalama hem de algılama için kullanılır
PBS, pH 7.4, %0.02 Tween-20, %0.1 BSA, %0.05 sodyum azid (PBS-TBN) içerir	MilliporeSigma	P3563 A7888 S8032 Serisi	%1'e kadar BSA kullanılabilir
Anti-Escherichia coli O157:H7 Antikoru	Sera Bakımı	5310-0326	Poliklonal
(EZ-Link Sülfo-NHS-LC-Biotin) (Delmek).	Termo Bilimsel™	A39257
E. coli O157:H7	Sera Bakımı	5370-0013	Isıyla öldürüldü
Salmonella serotip Typhimurium	Sera Bakımı	5370-0002	Isıyla öldürüldü
Campylobacter jejuni	Sera Bakımı	5370-0011	Isıyla öldürüldü
Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes)	Sera Bakımı	5370-0010	Isıyla öldürüldü
Streptavidin, R-Phycoerythrin Konjugatı (SAPE)	Termo Bilimsel™	S866 Serisi