Fare İdrar Glikoz Konsantrasyonlarının Kalitatif ve Kantitatif Değerlendirmesi için Testler

Özet

Bu video, fare idrarını toplama ve glikoz seviyelerini değerlendirme prosedürünü göstermektedir. Glikoz seviyesini değerlendirmek için, enzimlerle kaplanmış bir test şeridini ve kromojenik bir boyayı numuneye daldırın ve glikoz seviyelerini gösteren bir renk değişikliği başlatın. İdrar glikoz seviyelerini ölçmek için, artan glikoz konsantrasyonlarına sahip çok kuyulu bir plakaya bir idrar örneği verin, reaksiyon karışımını ekleyin ve inkübe edin. Standart bir eğri oluşturmak için absorbansı ölçün ve numune absorbansına göre glikoz seviyelerini hesaplayın.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Nokta idrar glikoz testi

1. Düz bir yüzeye bir parça temiz Parafilm yerleştirin.
2. Yavaşça bir fareyi kuyruğundan alın ve Parafilm'in üzerine yerleştirin.
3. Başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak fareyi tırnağından tutun. Tırnağa dizginlenirken fareyi nazikçe kaldırın ve farenin bir stres tepkisi olarak idrara çıkmasına neden olun. Parafilm yüzeyine bir damla idrar düşmesine izin verin. İdrar damlasını topladıktan sonra fareyi kafesine geri koyun.
4. Bir Diastix şeridinin reaktif ucunu Parafilm yüzeyinde toplanan taze idrar damlasına batırın. Şeridi hemen çıkarın ve renkli tarafı yukarı bakacak şekilde düz bir yüzeye yerleştirin. Şerit üzerinde bir rengin tam olarak oluşması için en az 30 saniye bekleyin. Geliştirilen rengi Diastix kabında sağlanan referans tablosu ile karşılaştırın (Şekil 1).
   Ipuç -ları: Fare Parafilm üzerine idrar yapmazsa, işaret parmağını kullanarak farenin alt karnına (idrar kesesi etrafına) hafif bir baskı uygulayın. Bu yaklaşım, idrar damlalarının parafilm üzerine salınmasına yardımcı olacaktır. Yukarıda açıklanan prosedürü uyguladıktan sonra idrar yapmayan fareler için 20 dakika bekleyin ve işleme tekrar başlayın. Tüm prosedürlerin IACUC yönergelerine bağlı kalarak gerçekleştirildiğinden emin olun.

2. Bir fare metabolik kafesi kullanılarak 24 saatlik idrarın toplanması

1. Üreticinin talimatlarına göre bir Tecniplast metabolik kafesi (Şekil 2) monte edin.
2. Besleme tertibatını toz haline getirilmiş yemle doldurun ve ardından besleme tertibatını üst haznedeki uygun metal tırnağa takın.
3. Su şişesi desteğini üst haznede kalan metal tırnağa sabitleyin.
4. Boş su şişesini doldurun ve ardından yudum borusunun delikte olduğundan emin olarak şişe desteğine kaydırın.
5. Metabolik kafese bir fare koyun ve ardından bir kapakla örtün.
6. Kafes kapağının doğru şekilde takıldığından emin olun.
7. Bir idrar toplama tüpü ve bir dışkı toplama tüpünü alt hazne tabanındaki uygun yerlerine yerleştirin.
8. 24 saat sonra idrar toplama tüpünü alın ve idrar glikoz konsantrasyonunu belirlemek için bir glikoz tahlili yapın. Glikoz tahlili aynı gün yapılmazsa, idrar örneğini -80 ° C dondurucuda dondurun.

>3. 24 saatlik idrar Glikoz konsantrasyonunun belirlenmesi

1. İdrar örneği -80°C'de saklanırsa, glikoz tahlili yapmadan önce numunenin çözülmesine izin verin.
2. 100 mg / dl stoktan, test kiti talimatlarına göre 25 mg / dl ile 0 mg / dl arasında değişen sekiz standart hazırlayın.
3. Standart kuyucukları ve idrar numunesi kuyularını, kit kılavuzuna göre tümü iki kez olmak üzere 96 oyuklu bir plakada hazırlayın.
4. Tüm kuyucuklara önerilen miktarda enzim karışımı ekleyerek reaksiyonu başlattıktan sonra, plakayı kapatın ve 37 ° C'de 10 dakika inkübe edin.
5. Bir plaka okuyucu kullanarak 500-520 nm'de absorbansı okuyun.
6. Verileri tahlil kiti talimatlarına göre analiz edin. Her bir standardın glikoz konsantrasyonuna karşı absorbansını çizin ve 24 saatlik idrar örneğinin glikoz konsantrasyonunu belirlemek için grafiği kullanın.

Sonuçlar

Şekil 1. Nokta idrar glikoz testi. Parafilm üzerinde toplanan fare idrar damlaları ve Diastix kabında sağlanan renk referans tablosu.

Şekil 2. 24 saat fare idrar toplama için Tecniplast metabolik kafes. Bir fare, 24 saat idrar toplamak i...