Karışık 3D Kültürlerde Hedeflenen Hücre Eliminasyonu için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

Özet

Kaynak: Sato, K. ve ark., Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi Tekniği Kullanılarak Karışık 3D Kültürden Seçici Hücre Eliminasyonu.J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, yakın kızılötesi fotoimmünoterapi yoluyla karışık bir 3D hücre kültüründen belirli hücrelerin seçici olarak çıkarılması için bir tekniği göstermektedir. Bu yöntemde, hedeflenen hücreler, bir NIR fotoemici ile konjuge edilmiş bir antikor kullanılarak doğru bir şekilde tanımlanır. Kızılötesi ışıkla müteakip ışınlama, hücre ölümünü indükleyerek hedeflenen hücreleri 3D kültürden etkili bir şekilde ortadan kaldırır.

Protokol

NOT: Aşağıdaki protokol, Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT) kullanarak belirli hücreleri ortadan kaldırmak için gerekli adımları açıklamaktadır. NIR-PIT ve hücre canlılığı ile ilgili kontroller ve diğer ayrıntılar başka bir yerde bulunabilir.

>1. Kızılötesi 700'ün (IR700) Monoklonal Antikorlara (mAb) Konjugasyonu

1. 0.1 M disodyum hidrojen fosfat (Na2HPO4) (pH_8.6) çözeltisinde 2-5 mg / ml'de ilgilenilen mAb'yi hazırlayın.
2. 6.8 nmol mAb ile 30.8 nmol 10 mM IR700'ü 0.1 M_Na2HPO4çözeltisinde (pH 8.6) bir mikrosantrifüj tüpünde karıştırın ve a....

Sonuçlar

Şekil 1. 3D hücre sferoidlerinde hedef hücre eliminasyonu (A431-luc-GFP ve 3T3-RFP hücrelerinin karışık sferoidleri).(A) NIR-PIT (2 J /^cm2) rejimi gösterilmiştir. (B) Tekrarlanan NIR-PIT, karışık bir 3D sferoidde hedef olmayan hücrelere (3T3-RFP) zarar vermeden hedef hücreleri (A431-luc-GFP) tamamen ortadan kaldırdı. Bar = 200 μm. (C) Lusif.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
IRDye 700DX Ester Kızılötesi Boya	LI-COR Biyobilim (Lincoln, NE, ABD)	929-70011
Na2HPO4	SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri)	S9763 Serisi
Sephadex G25 sütunu (PD-10)	GE Sağlık (Piscataway, NJ, ABD)	17-0851-01
Coomassie (bradford) Artı protein tahlili	Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, ABD)	PI-23200
Perfecta3D 96 Kuyulu Asılı Damla Plakaları	3D Biomatrix Inc (Ann Arbor, MI, ABD)	HDP1096-8
Optik güç ölçer	Thorlabs (Newton, NJ, Amerika Birleşik Devletleri)	PM100
LED: L690-66-60	Marubeni America Co. (Santa Clara, CA, ABD)	L690-66-60
Vectibix (panitumumab)	Amgen (Thousand Oaks, Kaliforniya, ABD)
35 mm cam alt tabak, çanak boyutu 35 mm, kuyu boyutu 10 mm	Cellvis (Dağ Manzaralı, CA, ABD)	D35-10-0-N

Serisi Serisi Serisi