Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Cerrahi Hazırlık, Anestezitizasyon ve Analjezi Rejimi
- Cerrahi platforma steril tek kullanımlık bir örtü (45,7 cm x 66 cm) yerleştirin. Fareyi nazikçe tutun, anestezi için ketamin (50 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) intraperitoneal (i.p) enjekte edin ve analjezi için deri altına 0.05 mg / kg buprenorfin enjekte edin.
- Anestezi derinliğini ayak parmağınızı kıstırarak sağlayın, tüm karın bölgesindeki kılları bir ustura ile tıraş edin ve fareyi 6-10x büyütmede ameliyat mikroskobu altında steril cerrahi platforma yerleştirin.
2. Donör Dalak Hasadı
- Karnı bir alkol hazırlama pedi ile sterilize edin, uzuvları cerrahi bantla sabitleyin ve kasıktan ksifoid işlemine kadar 3-4 cm orta hat dikey cilt kesisini makasla yapın.
- Karın duvarını ataçlardan yapılmış steril ekartörlerle geri çekin. Dalağı ortaya çıkarmak için steril bir pamuklu çubukla bağırsakları karnın sağ tarafına (cerrahın sol) tarafına hareket ettirin. Dalağa yapışık kısa gastrik veni steril düşük sıcaklıkta bir koter ile koterize edin (Şekil 1A). Nemli kalması için dalağın üzerine 37 °C tuzlu su ile ıslatılmış bir parça steril gazlı bez yerleştirin (Şekil 1B).
- Portal ven dallarını (superior pankreatikoduodenal ven ve sağ gastrik ven) bağlayarak portal veni pankreas dokusundan ayırın ve mobilize edin (Şekil 1C); splenik venin distalindeki portal venin etrafına bir dikiş yerleştirin (Şekil 1D).
Dalak - arteri ile aort ve çölyak gövdesini ortaya çıkarmak için dalağı sağ tarafa çevirin (Şekil 1E). Hepatik arter ve gastrik arteri bağlayarak aort-çölyak-splenik arteri diseke edin ve mobilize edin; çölyak arterin proksimalindeki aort çevresine bir dikiş yerleştirin (Şekil 1F-G).
- Tüm vücudu heparine etmek için inferior vena kava (IVC) içine 100 uluslararası birim (IU) heparin enjekte edin ve heparinin etki etmesini sağlamak için 3 dakika bekleyin. Aort proksimal ile çölyak arteri bağlayın, portal veni kesin ve ardından abdominal aort distalinden çölyak gövdesine 10 mL heparinize soğuk (4 °C) salin (10 mL/20 s) kullanarak tüm vücuda perfüze edin (Şekil 1H).
- Dalak greftini, ilişkili aort-çölyak-dalak segmenti ve portal ven ile birlikte bir splenik ven segmenti ve pankreas dokusunun küçük bir kısmı ile blok halinde toplayın. Nakilden önce grefti 5 mL 4 °C tuzlu suda koruyun. Fareyi servikal çıkık ile ötenazi yapın.
3. Alıcı Splenektomi ve Dalak Grefti İmplantasyonu
- Cerrahi platforma bir ısıtma yastığı yerleştirin ve sıcaklığı 37 °C'ye ayarlayın. Steril bir cerrahi platform oluşturmak için ısıtma yastığının üzerine steril bir örtü (45,7 cm x 66 cm) yerleştirin. Cerrahi hazırlık ve anestezik için 2.1 ve 2.2 adımlarını tekrarlayın. 3-4 cm'lik bir orta hat kesisi yapın ve adım 2.1 ve adım 2.2'de anlatıldığı gibi karın duvarını geri çekin.
- Alıcının dalağını ortaya çıkarmak için steril bir pamuklu çubukla bağırsağı farenin sağ tarafına dikkatlice hareket ettirin. Dalak damarını ve arteri bağlayın ve dalağı çıkarın.
- Bağırsağı dikkatlice farenin sol tarafına doğru hareket ettirin ve bağırsakları ıslak gazlı bezle (steril 37 °C tuzlu su ile ıslatılmış) kapatın. İnfrarenal aort ve IVC'nin lomber dallarını diseksiyon ve ligasyon; İki adet 4 mm mikrovasküler klemp kullanarak infrarenal aort ve IVC'yi çapraz klempleyin.
- İnfrarenal aorttan (tam kalınlıkta) 11-0 naylon bir sütür yerleştirin ve mikromakasla tek bir kesi ile eliptik bir aortotomi oluşturmak için geri çekin (uzunluk donör aortun çapına uygun olmalıdır, Şekil 2A). Eliptik bir venotomi oluşturmak için 30 G'lik bir iğne kullanarak IVC'yi delin ve mikromakas kullanarak açıklığı donör portal ven uyumlu uzunluğa kadar uzatın (Şekil 2A).
- İntraluminal kanı veya kan pıhtısını (aort ve IVC'de) 500 μL heparinize salin (10 ünite / mL) ile temizleyin.
- Dalak greftini alıcı fare karnının sağ tarafına yerleştirin; donörün aort manşetini ve donörün portal venini dikkatlice tanımlayın. Damarların bükülmediğinden emin olduktan sonra, dalak greftini soğuk (4 °C) tuzlu su ile ıslatılmış gazlı bezle örtün.
- Donörün aort manşetini alıcının aortotomisinin proksimal ve distal apeksine iki kalıcı sütürle (11-0 naylon sütür, aşağıdakiyle aynı) bağlayın (Şekil 2B,C). Donörün aort manşeti ile alıcının aortotomisi (ön duvar) arasında 2-3 lokma sürekli 11-0 naylon sütür ile anastomoz yapın (Şekil 2D). Dalak greftini alıcının sol tarafına ters çevirin; vericinin aort manşeti ile alıcının aortotomisi (arka duvar) arasında anastomoz yapın (Şekil 2E).
- Vericinin portal venini alıcının IVC'sinin arka duvarına bağlamak için bir anastomoz gerçekleştirin, IVC'nin içinde 4 ila 5 ısırık sürekli sütür kullanın ve ardından IVC'nin dışındaki sütürü kapatın (Şekil 2F, G).
- Damar klemplerini serbest bırakın ve dalak rengi geri gelene kadar kanamayı tamponlamak için steril pamuklu çubuk kullanın (Şekil 2H).
- Karnı 5-0 sentetik emilebilir vicryl sütür ile sürekli bir şekilde kapatın. Cilt tabakasını 5-0 naylon sütür ile kesikli bir şekilde kapatın.
not: 3.7-3.8 adımları için, alternatif olarak, önce vericinin portal veni ile alıcının IVC'si arasında bir anastomoz yapın (adım 3.8); Daha sonra, aortun iç kısmında 2 ila 3 sürekli sütür kullanarak vericinin aort manşeti ile alıcının aortotomisinin arka duvarı arasında bir anastomoz yapın ve aortun dış tarafındaki dikişi kapatın.
4. Hayvanların Geri Kazanılması
- Karın kapatıldıktan sonra 4 ayrı yerden (0.25 mL / konum) deri altına 1 mL ılık salin enjekte edin.
- Ameliyattan sonraki ilk birkaç saat boyunca fareyi sıcaklık kontrollü bir inkübatörde (30 °C) tutun, yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareyi izleyin ve ardından fareyi normal yiyecek ve su ile yeni ve temiz bir kafese aktarın, kafesin altında bir ısıtma yastığı (30 °C) var. Ameliyat sonrası fareyi ayrı bir kafeste tutun.
5. Ameliyat Sonrası Ağrı Yönetimi
- Analjezi rejimini sürdürmek için ameliyattan 24 saat ve 48 saat sonra deri altına 0.05 mg / kg buprenorfin enjekte edin.
