Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Tümör Sferoidlerinde Sızan T Hücrelerinin Üç Boyutlu Ko-Kültür Modeli

2.1K görüntülenme

⸱

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Lin, Y., et al. 3D Kültürde Kanser Hücresi İstilasının ve T Hücresi Sitotoksisitesinin İzlenmesi. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu videoda, üç boyutlu bir tümör sferoidi ve T hücresi ko-kültürü oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Tümör sferoidleri içeren mikrokuyucuklara sahip bir agaroz dökümü hazırlanır, ardından T hücrelerinin eklenmesi takip edilir. İnkübasyondan sonra, bu kurulum, kontrollü bir üç boyutlu ortamda T hücrelerinin tümör sferoidleri ile etkileşiminin incelenmesine izin verir.

Protokol

1. Sferoidlerin üretimi

  1. 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde %2 agaroz hazırlayın ve otoklavlayın (ör., 50 mL 1x PBS'de 1 g agaroz) ve otoklav 35 ve 81 mikrokuyulu kauçuk kalıplar.
    Dikkat: İmmünohistokimya (IHC) işlemi için agaroz kalıpları oluşturmak için düşük erime noktalı agaroz kullanmaktan kaçının.
  2. Agaroz dökümleri hazırlayın
    NOT: 35 mikrokuyu dökümleri, invazyon, immünofloresan (IF) ve hücre izolasyon testleri için kullanılır. 81 mikrokuyu dökümleri sitotoksisite, IHC, hücre izolasyonu ve ribonükleik asit (RNA) ekstraksiyon testleri için kullanılır.
    1. Agaroz otokla....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3D Petri KaplarıMikro Dokular A.ŞZ764019 & Z764051protokollerde "kauçuk kalıplar" olarak anılır; 81-mikrokuyu ve 35-mikrokuyu kalıpları
8 Kuyulu Hazneli KaydıraklarLab-Tek154534
Agaroz Tip I, düşük EEOSigma-AldrichA6013
DMEM, fetal sığır serumuThermoFisher (Termo Balıkçı)11965092, 16000044protokollerde "hücre kültürü ortamı" olarak anılır
DEV/SINIRThermoFisher (Termo Balıkçı)11875093T hücresi kültür ortamı için
. Gazetesi Serisi

Daha fazla makale keşfet

Tümör SferoidiT Hücresi Ko-kültürü3D Kültür ModeliAgaroz DökümüMikrokuyu EkimlemeT Hücresi İnfiltrasyonuKanser Hücresi İnvazyonuIşık MikroskobuHücre Kültürü İnkübasyonuTümöre Özgü T Hücreleri