Afinite Kromatografisi Kullanılarak Kendi Kendine Birleşen Protein Nanopartiküllerinin Saflaştırılması

Abstract

Kaynak: Karch, C. P. ve diğerleri, Trimerik Epitop Sunumu Gerektiren Aşılar için E. coli ile İfade Edilen Kendi Kendine Birleşen Protein Nanopartiküllerinin Üretimi.J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, afinite sıvı kromatografisi kullanılarak histidin etiketli kendi kendine monte edilmiş protein nanopartiküllerinin veya SAPS'lerin saflaştırılmasını gösterir. Elde edilen saflaştırılmış SAPN fraksiyonları, aşı geliştirme için uygundur ve potansiyel immünoterapötik uygulamalar için umut vaat etmektedir.

Protocol

1. E. coli BL21(DE3)'te altı sarmal demeti (SHB-SAPN) Proteini içeren Kendiliğinden Birleşen Protein nanopartikülleri çekirdeğinin ifadesi

1. Ortamın 95 mL A bileşenini ve 5 mL B bileşenini üreticinin talimatlarına göre 2 L'lik steril bir cam Erlenmeyer şişesinde karıştırın (Malzeme Tablosuna bakın). 100 μg / mL'lik bir nihai konsantrasyona ampisilin ekleyin.
2. Ortamı önceden kurulmuş bir gliserol stok kültüründen E. coli ile aşılayın. Kültürü 30 ° C'de, dakikada 200 dönüşte (rpm) 48 h.
   çalkalayarak inkübe edin NOT: Kullanılan E. coli BL21 (DE3) stoğu, SHB-SAPN geni ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanol	balıkçı	BP26181	4 L
Ampisilin	balıkçı	BP1760-25	25 gr
Corning Tek Kullanımlık Vakum Filtresi/Depolama Sistemleri	balıkçı	09-761-108	Çeşitli boyutlar
GE Healthcare 5 mL HisTrap HP Hazır Ambalajlı Kolonlar	GE Sağlık Hizmetleri	45-000-325	5'li paket
Gliserol	balıkçı	BP229-4	4 L
İmidazol	balıkçı	Ø3196-500	500 gr
Sihirli Medya E. coli Ekspresyon Ortamı	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	K6803	1 L
MilliporeSigma Millex Steril Şırınga 0.22 mm Filtreler	Kırlangıç	SLGV033RB	250'li paket
Tek Atış BL21 Yıldız (DE3) Kimyasal Olarak Yetkin E. coli	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	C601003	20 şişe
Sodyum Fosfat Monobazik	balıkçı	BP329-500	500 gr
Tris Tabanı	balıkçı	BP152-1	1 kg
üre	balıkçı	BP169-500	2,5 kg
ekipman
Fiberlite F14-14 x 50cy Sabit Açılı Rotor	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	096-145075	rotor
NGC Quest 10 Kromatografi Sistemi	BioRad (BiyoRad	7880001	Protein saflaştırmasına yardımcı olmak için FPLC
Sonifer 450	Branson	096-145075 olarak da bilinir	Ses Seviyesi