Zika Virüsü Büyümesinin Güçlü İnhibitörleri Olarak İnterferonları Taramak için İn Vitro Test

Özet

Kaynak: Contreras, D. ve ark., Zika Virüsü Enfeksiyöz Hücre Kültürü Sistemi ve İnterferonların İn Vitro Profilaktik Etkisi. J. Vis. Uzm. (2016)

Video, bir insan patojeni olan Zika virüsüne karşı antiviral aktiviteye sahip interferonların taranması için bir in vitro testi göstermektedir. Konakçı hücre içinde, Zika virüsü içselleştirildikten sonra çoğalır, komşu hücreleri enfekte eder ve farklı bölgeler veya viral plaklar oluşturur. Antiviral bir ajan olarak işlev gören tip I interferon, virüs çoğalmasını engeller, böylece konak hücre tek tabakasında viral plakların oluşumunu önler.

Protokol

1. Sitokin Kütüphanesinin Zika Virüsü Enfeksiyonuna Karşı Taranması

1. 12 oyuklu bir plaka kullanarak 1 x 10⁵ hücrede saf Vero hücrelerini tohumlayın. Hücreler bağlandıktan sonra (tohumlamadan 6 saat sonra), her sitokini
   biyolojik kopyalarda belirtilen konsantrasyonlar (2 ml hacim / kuyu). Tek başına araç (PBS) kontrolünü dahil edin.
2. Tedaviden 12 saat sonra, Zika viral enfeksiyonu (kuyucuk başına 400 μl'de 0.1 MOI) gerçekleştirin. Enfeksiyon olmadan negatif kontrol kuyularını dahil edin (sahte).
3. Enfeksiyondan 4 saat sonra, viral inokulumu sitokin ile muamele edilmiş ortamla (2 ml) değiştirin. Hücreleri 37 ° C'de 44 saat daha inkübe edin.
4. Enfeksiyondan 48 saat sonra, bir faz kontrast mikroskobu kullanarak viral plakları sayın ve 40X büyütmede enfekte olmuş hücrelerin temsili görüntülerini elde edin (Şekil 1).

Sonuçlar

Şekil 1: İnterferonlar güçlü anti-Zika viral aktivitesi göstermektedir. (A) Araç kontrolüne kıyasla çeşitli sitokinler tarafından Zika viral büyümesinin modülasyonunu gösteren grafik. Ortalama değerler ve standart sapma çubuk grafikte gösterilir. İnterferonlar Zika virüsü replikasyonunun istatistiksel olarak anlamlı inhibisyonunu gösterdi (p değeri <0.05). (

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Vero Hücre Hattı	ATCC (Uzay Servisi)	CCL-81
Zika viral suşu PRVABC59	Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri (CDC)
IL-6	Peprotech teknolojisi	200-06
IL-1 alfa	Peprotech teknolojisi	200-01A
TNF-alfa	Peprotech teknolojisi	300-01A
İnterferon alfa A	Ar-Ge Sistemleri	11100-1
İnterferon beta	Peprotech teknolojisi	MÖ 300-02
İnterferon gama	Peprotech teknolojisi	300-02
Santrifüj 5415R	Eppendorf Belediyesi	5415R
Santrifüj 5810R	Eppendorf Belediyesi	5810R
Nikon Intenselight C-HGFI ile Nikon Eclipse Ti İmmünofloresan Mikroskobu	Nikon

Serisi Serisi arası Serisi Serisi