Transgenik Zebra Balığı Larvasında Av Tarafından Uyarılan Nöronal Aktivitenin İncelenmesi

Özet

Kaynak: Muto, A. et al., İki Fotonlu Lazer Kullanılarak Bir Nöronal Popülasyonun Ablasyonu ve Zebra Balığı Larvalarında Kalsiyum Görüntüleme ve Davranışsal Kayıt Kullanılarak Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, floresan kalsiyum indikatör komplekslerini eksprese eden nöronları ile kalsiyum indikatör tabanlı floresan görüntüleme kullanarak transgenik zebra balığı larvalarında görsel av tespitini inceleme yöntemini göstermektedir.

Protokol

1. İki Fotonlu Lazer Mikroskobu Kullanılarak Bir Nöron Alt Popülasyonunun Ablasyonu

NOT: Kullanıcılar ablasyondan sonra Ca görüntüleme yapmayı planlıyorsa, UAShspzGCaMP6s satırını kullanın. Kullanıcılar ablasyondan sonra davranışsal kayıt yapmayı planlıyorsa, EGFP pozitif hücrelerin ablasyonunun gerçekleştirilmesi GCaMP6s eksprese eden hücrelerden daha kolay olduğu için UAS: EGFP hattını kullanın.

1. Çalışılacak belirli nöronları ve UAS: EGFP veya UAShspzGCaMP6'ları etiketleyen bir Gal4 hattının eşleşmesini ayarlayarak başlayın. Sedef homozigotlarının elde edilebilmesi için her iki ebeveyn için de ....

Sonuçlar

Şekil 1. Zebra balığı larvaları. (A) Beş günlük (döllenmeden 5 gün sonra (5-dpf)) zebra balığı larvası ve avı, bir paramesyum. (B) %2 düşük erime noktalı agaroz içine gömülü 4-dpf sedef larvası. Sedef suşunun vücutta siyah pigmentlerden yoksun olduğunu, retina pigment epitelinin ise sağlam olduğunu unutmayın. Ölçek çubuğu: 0,5 mm. (C) Agarozda zebra balığı larvalarını.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
NuSieve GTG Agaroz	Fransa	Kat.#50080	düşük erime sıcaklığı agaroz
6 cm petri kabı	doğan	Ürün#:351007
diseksiyon iğnesi	TEK BİR Şirket	kedi. Hayır. 2-013-01	https://keystone-lab.com/en/item/detail/404142
LSM7MP	Carl Zeiss		İki Fotonlu Lazer Tarama Mikroskobu
W Plan-Apochromat 63x/1.0	Carl Zeiss		63X objektif lens
Görüntüleyici.Z1	Carl Zeiss		bir epi-floresan mikroskobu
Zen	Carl Zeiss		Konfokal mikroskoplar için görüntü elde etme yazılımı
Güvenli Sızdırmaz Hibridizasyon Haznesi Contası, 8 odacıklı, 9 mm çap x 0,8 mm derinlik	Moleküler Problar	Katalog # S-24732	Ca görüntülemede kayıt odası olarak kullanılır
Cerrahi bıçak	MANI (MANİ)	Oftalmik bıçak MST15
ORCA-Flaş 4.0	Hamamatsu Fotonik	Modeli: C11440-22CU	Bilimsel bir CMOS kamera
HCImage	Hamamatsu Fotonik		Görüntü acuisition yazılımı
Sabit Disk Kayıt modülü	Hamamatsu Fotonik		Film dosyalarının kısa sürede bir sabit disk sürücüsüne kaydedilmesini sağlayan bir yazılım modülü
Nokta Gri Çekirge3 4.1 MP Mono USB3 Visio	FLIR Sistemleri A.Ş.	Ürün No. GS3-U3-41C6NIR-C	CMOS kamera
XIMEA xiQ kamera	XIMEA (XIMEA)	Ürün No. MQ042RG-CM	CMOS kamera
Bir halka LED ışığı	Ccs	Modeli: LDR2-100SW2-LA	Beyaz LED
Naylon örgü 32μm	Tokyo Ekranı	N-No.380T	http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20347/
Naylon örgü 13μm	Tokyo Ekranı	N-Hayır. 508T-K	http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20347/
Metal seive 150 mikron diyafram açıklığı	Tokyo Ekranı		http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20341/#ami
Metal seive 75 mikron diyafram açıklığı	Tokyo Ekranı		http://www.tokyo-screen.com/cms/sta20341/#ami
EBIOS (EBIOS)	Asahi Gıda ve Sağlık Hizmetleri Ltd. Şti.		Kuru bira mayası
Laboratuvar GÖRÜNÜMÜ	Ulusal Enstrümanlar		Programlama için entegre bir geliştirme ortamı
Mai-Tai HP	Spektrum Fiziği		İki fotonlu lazer