$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hayvan Hazırlama ve Anestezi
- İzofluran / oksijen inhalasyonu ile farede anesteziyi indükleyin. Anestezinin indüksiyonu için% 4 izofluran ve 2.5 L / dk oksijen akışında bakım için% 2-3 kullanın. Anestezinin sürdürülmesi için izofluran yüzdesini farenin durumuna göre ayarlayın, yani küçük ve zayıf fareler daha az anestezik gerektirir. Yeterli anesteziyi onaylayın, ör. ağrı çekme refleksinin olmadığını kontrol etmek için arka bacak yürüme pedine hafif bir baskı uygulayarak.
- Anestezi sırasında vücut sıcaklığının düşmesini önlemek için 37 °C'de termostatik bir ısıtma plakası kullanarak fare vücut sıcaklığını kontrol edin.
- Anestezinin sürdürülmesi için fareyi nosekon ile yerleştirin. Nosekonun hava yollarını tıkamadığını ve hayvanın düzenli nefes aldığını kontrol ederek hayvanın yeterli oksijen verdiğinden emin olun.
- Kayıt sırasında, solunum hızını (anestezide yaklaşık 1 Hz) ve hafif basınçta geri çekilme refleksinin olmadığını gözlemleyerek farenin yeterince uyuşturulup uyuşturulmadığını izleyin. Anestezi yeterince derin değilse izofluran konsantrasyonunu manuel olarak arttırın.
- Ölçümlerden sonra, yaklaşık 2-5 dakika boyunca sternal yaslığı korumak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareyi ısıtma plakası üzerinde veya bir kızılötesi lambanın sıcaklığında dinlenmeye bırakın. Anesteziden tamamen iyileşene kadar fareyi gözetimsiz ve diğer farelerle birlikte bırakmayın.
2. Ön Ayaklarda CMAP Ölçümü
- Ön ayak CMAP ölçümleri için 27 G iğne elektrotlarını kullanın. Önerilen elektrot konumlandırma yerleri için Şekil 1'e bakın.
- Elektrotları ön ayaklara aşağıdaki gibi yerleştirin.
- Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtma yastığının üzerine yerleştirin ve her iki ön ayağı vücudun yanlarına uzatmak için yapışkan bant kullanın (Şekil 1B).
- Uyarıcı elektrotları (1 = anot ve 2 = katot) brakiyal pleksus siniri ile hizalamak için ön ayağın her iki tarafına deri altına yerleştirin. İğneyi deriden dik olarak sokmak için cildi kaldırın ve alttaki kasları delmeden iğnenin yaklaşık 5 mm'sini cildin altına itin.
- Kayıt elektrodunu (3) cildi kaldırarak biceps brachii kasının üzerine deri altından yerleştirin. Referans elektrodunu (4) 3 mm derinlikte 30 derecelik bir açıyla yürüme pedlerinin üzerine yerleştirin. Toprak elektrodunu (5) deri altına farenin yan tarafına yerleştirin.
not: Elektrotlar bu kurulumda birbirine çok yakındır. Elektrotların birbirine temas etmesini önleyin çünkü bu, kaydı bozar.
3. Veri Toplama
- Kontrol ünitesindeki tekrarlayan uyaran düğmesine basarak stimülasyonu başlatın ve uyaranı artırmak için yoğunluk kontrol düğmesini çevirin. 0.1 ms uyaran süresi ile 1 darbe/sn kullanarak tüm aksonları uyarın. Yazılımdaki açılır menülerden doğru frekansı ve süreyi seçin.
- Supramaksimal uyaranlara (5-20 mA; 60 mA'ya kadar demiyelinizan koşullarda) ulaşmak için, CMAP yanıtının genliği artmayı bırakana kadar yoğunluk kontrol düğmesini çevirerek artan uyaranları uygulayın. Oradan, CMAP genliğinin maksimum tepkisine ulaştığından emin olmak için uyaranı %20 daha artırın. Tekrarlayan uyaran düğmesine tekrar basarak stimülasyonu sonlandırın.
- Kayıtta aşağıdaki noktaları belirtmek için işaretleyici aracını kullanın: uyaranın başlatılması, yanıtın başlatılması, maksimum pozitif tepe noktası ve maksimum negatif tepe noktası (Şekil 2).
- Gecikmeyi (ms cinsinden) uyaranın başlamasından yanıtın başlamasına kadar olan gecikme olarak belirleyin (Şekil 2). Yanıtın başlangıcını, genliğin artmaya başladığı en erken nokta olarak tanımlayın. Aksonlardaki demiyelinizasyonu değerlendirmek için gecikmeyi kullanın.
- Maksimum negatiften maksimum pozitif tepe noktasına kadar genliği (mV) ölçün (Şekil 2). Fonksiyonel aksonların sayısını ilişkilendirmek için genliğin büyüklüğünü kullanın.
