$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. VEP Elektrot İmplantasyonu
- Hayvanı intraperitoneal ketamin (75 mg / kg) ve medetomidin (0.5 mg / kg) enjeksiyonu ile uyuşturun.
not: Anestezi indüksiyonunu takiben, ameliyata başlama göstergesi olarak çekilme reflekslerini (çimdik testi, kornea ve palpebral refleks vb.) ve bunların yokluğunu gözlemleyin. Ameliyat boyunca hayvanları sürekli olarak izleyin ve refleksler varsa ek anestezik ilaçlar (ek yükleme başına başlangıç ketamin dozunun% 10'u) uygulayın. Deneylerde erişkin sıçanlar (>12 hafta) kullanılmaktadır.
- Cerrahi bölgenin cildini tıraş edin. Ameliyat sırasında vücut ısısını korumak için hayvanı bir ısıtma pedine (37 °C) yerleştirin. Povidon-iyotun topikal uygulamasıyla cildi hazırlayın. Cerrahi örtü uygulayın. Genel anestezi altında kornea kuruluğunu önlemek için topikal oftalmik merhem sürün. Steril aletler kullanarak asepsi koruyun.
- Kafa derisinin orta hattında uzunlamasına bir cilt kesisi yapın. Kafatasının iyi bir şekilde ortaya çıkmasını sağlamak için bağ dokusunu temizleyin.
- Bregmanın 7 mm arkasında ve orta hattın 3 mm yanında bir mikro el matkabı kullanarak küçük çapak deliklerini manuel olarak dikkatlice delin.
- Vida elektrotlarını kafatasından kortekse (alan 17) implante edin ve kortekse yaklaşık 0,5 mm derinliğe kadar nüfuz edin. Orta hat 3 mm rostral üzerine bir referans vida elektrodu bregmaya implante edin. Vidaları kaplamak ve sabitlemek için diş çimentosu uygulayın (her zaman gerekli değildir).
- Başın derisini dikin, cilde antibiyotikli merhem uygulayın ve hayvanın bir ısınma pedi üzerinde anesteziden kurtulmasına izin verin.
Not: Alternatif olarak, elektrotlar açıkta bırakılabilir, böylece her kayıtta cildin yeniden açılmasına gerek kalmaz. Ameliyatın kesilmesinden hemen sonra, ancak anestezik iyileşmeden önce, steroid olmayan bir antienflamatuar ilaç (NSAID) (ameliyat öncesi uygulanmazsa) veya bir opioid analjezik uygulayın. Hayvanları anesteziden tamamen iyileşene ve ayakta kalana kadar sürekli izleyin.
- VEP kaydından önce hayvanların ameliyattan sonra iyileşmesi için en az 1 hafta bekleyin.
2. VEP Kaydı
- Hayvanı uyuşturun ve cildi 1.1 ve 1.2.
olarak hazırlayın
Not: Elektrofizyolojik kayıt için daha düşük bir anestezik dozu kullanılabilir (ketamin 40 mg / kg ve medetomidin 0.25 mg / kg).
- Fareyi karanlık bir odaya yerleştirin ve 5-30 dakika boyunca karanlığa uyum sağlamasına izin verin. Bazı durumlarda, sıçanlar skotopik için karanlığa uyarlanmış O/N veya fotopik VEP kayıtları için ışığa uyarlanmış olabilir.
- Rektal termometre probu ile homootermik battaniye sistemi ile vücut sıcaklığını 37 ± 0,5 °C'de tutun.
- Öğrencileri %1.0 tropikamid göz damlası ile genişletin. Önceden yerleştirilmiş yerinde vida elektrotlarına erişmek için kafatasının üzerindeki cildi açın.
- Uyarılmış gözün kontralateral görsel korteksi üzerindeki vidayı ve referans vidasını amplifikatöre bağlayın. Toprak olarak kuyruğa bir iğne elektrodu yerleştirin. Elektrot empedansını 5 kΩ'un altında ölçün ve koruyun.
- Üstün göz izolasyonu sağlamak için bir mini-Ganzfeld stimülatörünü doğrudan göz kapaklarının etrafındaki cilde yerleştirin. Stimülatörün aydınlatmasının önceden bir fotometre ile kalibre edilmesi gerekir.
- Sırasıyla 1 ve 100 Hz'lik düşük ve yüksek bant geçiren filtre ayarlarıyla, 1 Hz frekansında 1 kez yanıp sönen ışıklar yoluyla fotik stimülasyon sağlayın. Sinyal örnekleme hızı 5 kHz.
'dir
Not: Her döngü sırasında ikiden fazla s'nin toplandığından emin olmak için sinyaller en az yaklaşık 250 - 300 Hz'de örneklenmelidir.
- Cildi geri dikin ve anesteziden kurtulmak için hayvanları bir ısınma pedi üzerinde tutun. Kayıt, belirli bir süre boyunca fonksiyonel değişiklikleri izlemek için tek tek hayvanlar üzerinde tekrar tekrar kaydedilebilir.