Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Cerrahi İşlem için Boru, Elektrot ve Aletlerin Hazırlanması
- Aşağıdaki mikrocerrahi aletleri kullanın: cerrahi makas, açılı mikro makas, doku forsepsi, bir çift Dumont #7 ve #5 kavisli mikro forseps, bir mikro iğne tutucu ve ekartörler.
not: Bu akut bir prosedürdür, bu nedenle aletlerin sterilize edilmesine gerek yoktur. Kullandıktan sonra uçları %70 etanol ile temizleyin ve silin.
- Hortumu %70 etanole batırın ve kullanmadan önce steril %0.9 NaCl ile 100 U/mL heparin ile yıkayın. Sisteme hava kabarcıkları girmesini önlemek için boruyu dolu bırakın.
- İntrakavernöz basınç (ICP) ölçümü için bir kateter yapmak üzere 20-30 cm'lik bir polietilen (PE)-50 boru parçası kesin. Basıncı azaltmak, azaltmak için borunun mümkün olduğunca kısa olduğundan emin olun.
- Steril bir 24G iğneyi, iğne ortadan kırılana kadar yan yana bükün. Penil crus'a yerleştirmek için parçayı eğim ile PE tüpünün distal ucuna bağlayın. Basınç dönüştürücüsüne bağlantı için diğer yarısını göbeğe yerleştirin. Sistemi heparinize salin (100 U/mL) ile doldurun.
- Bipolar Teflon kaplı elektrodu yapmak için, iki adet 125 μm gümüş teli eşit uzunlukta kesin. Kabloları masanın kenarına tutturmak için bir parça bant kullanın ve bunları birbirine geçirin. Ardından elektrodu siyah bir plakaya takın.
- Teflon'a küçük bir kesi yapın ve elektrotların uçlarından 4-5 mm uzunluğunda bir Teflon kaplamayı sıyırmak için # 5 mikro forseps kullanın. Eşit uzunluk elde etmek için uçları bir neşterle kesin ve uçları bir neşter bıçağının kör kenarı etrafında bükerek kancalar oluşturun.
- Elektrodu, kancalar yukarı bakacak şekilde ucu siyah plakanın kenarından hafifçe uzanacak şekilde bantlayın. Silikon yapıştırıcıyı plastik bir plaka üzerinde 10 saniye karıştırın ve elektrotun etrafına kancadan 1-2 mm uzakta bir tutkal baloncuğu sarın.
- Kullanmadan önce yaklaşık 5 dakika kurumasını bekleyin (Şekil 1). Stimülatöre bağlantı sağlamak için Teflon'u diğer uçtaki daha uzun bir bölümden sıyırın.
not: Distal uçtaki kancaları yeniden yaparken, elektrot birçok kez tekrar kullanılabilir.
2. Hayvanın Hazırlanması
- Hayvanı uyuşturduktan sonra karın, boynun ve perinenin alt yarısını tıraş edin. Hayvanı% 70 alkolle ve ardından üç kez povidon-iyot ile ovalayın. Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir cerrahi ped üzerine yerleştirin. Veteriner göz merhemi uygulayın ve anesteziyi% 2.5 izofluran ve taşıyıcı olarak 0.8 L / dak oksijen içeren bir burun konisine geçirin.
not: Kabul edilebilir bir anestezi seviyesi elde etmek için izofluran ve oksijen seviyesini ayarlayın.
3. Ameliyat Öncesi Hazırlık
- Tüm cerrahi prosedürü ameliyat mikroskobu altında gerçekleştirin: 3.15X ile 20X arasında değişen bir büyütme yeterlidir. Ameliyat boyunca eldiven kullanın ve temiz bir ortam sağlayın. Fareyi bir örtü üzerine yerleştirin.
4. ICP ölçümü için Ischiocavernosus kas diseksiyonu
- Penis tabanı seviyesinden başlayıp aşağıya doğru uzanan orta hattın 5 mm yanında 1 cm'lik dikey cilt kesisi yapmak için neşter, düz makas ve Dumont #7 kavisli mikro forseps kullanın (Şekil 2A). Bir Q-ucu kullanın ve skrotumun lateral fasyasını dikkatlice ayırın (Şekil 2B). Fasyayı diseke ettikten sonra, ekartörleri takın ve iskiyal tüberoziteyi bulmak için pamuk uçlu bir takas ile palpe edin (Şekil 2C).
- Bu noktanın medialindeki yağ dokusu medialinden, ischiocavernosus kası görüntülenene kadar diseksiyon yapın (Şekil 3A). Bir çift Dumont #7 kavisli mikro forseps kullanın ve kası uzunlamasına ayırın. Tunika albuginea parlak beyaz bir yapı olarak görünecektir (Şekil 3B). Mikro forseps ve mikro makas kullanarak, rotasını görmek için tunika albuginea'yı yeterince açığa çıkarın (Şekil 3C).
- Sistem ayarlarının kalibrasyonundan sonra, penil crus'a paralel çalıştığından emin olarak perine üzerindeki deriden hortum yerleştirin (Şekil 4). Çizgiyi yerinde bırakın ve kesiği tuzlu su ile nemli tutun.
5. Stimülasyon için CN Diseksiyonu
- Önce bir neşter, ardından bir çift düz makas ve mikro forseps kullanarak deriden 2 cm daha düşük, orta hatlı bir karın kesisi yapın. Mesane ve prostatı ortaya çıkarmak için linea alba ve alttaki kas dokusu boyunca fasya boyunca eşleşen bir kesi oluşturun.
- İyi bir pozlama elde etmek için ekartörler kullanın. Prostatın dorsolateral yüzü üzerinde çalışan majör pelvik ganglion (MPG) ve kavernöz sinirin (CN) net bir şekilde görüntülenmesini sağlamak için prostatı yağ dokusundan ayırmak için pamuk uçlu sürüntüler kullanın (Şekil 5).
- MPG ve CN'nin görüntülenmesinden sonra, MPG'nin 2-5 mm distalindeki sinirin üzerindeki fasyayı açılı mikro makasla dikkatlice kesin (Şekil 6a). # 5 mikro forseps kullanarak, 4 mm uzunluğunda bir kısmı serbest bırakmak için dokuyu sinirin her iki tarafına ve altına yayın (Şekil 6b) ve sinirin altına 9-0 sütür kaydırın (Şekil 6c).
- Bipolar elektrotun kancalarının sinir etrafına yerleştirilmesini kolaylaştırmak için dikiş yardımıyla siniri hafifçe yükseltin (Şekil 7a). Bir asistanın iki bileşenli silikon yapıştırıcıyı bir insülin iğnesinin ucuyla 5 saniye boyunca karıştırmasına izin verin. Siniri kurutun ve yapıştırıcıyı kancaların ve sinirin etrafındaki alana uygulayın (Şekil 7c, d). Yapıştırıcının kurumasını sağlamak için elektrodu yaklaşık 1 dakika boyunca hafifçe çekerek siniri yüksekte tutun.
- Elektrotun herhangi bir şekilde çekilmesini veya bükülmesini önlemek için sağ taraftaki ekartörler dışındaki ekartörleri çıkarın. Açıkta kalan organları tuzlu su ile ıslatın ve kesi üzerine tuzlu suya batırılmış gazlı bez koyun.
6. ICP ölçümü için kavernöz cisim kanülasyonu
- Ekartörleri kullanarak tunika albuginea'nın görselleştirmesini geri yükleyin. Ekartörleri ischiocavernosus kasına takmadığınızdan emin olun, çünkü bu, crus'u bozacaktır.
- İğneyi takın ve boruyu tunika albuginea'ya sokmadan önce heparinize tuzlu su ile yıkayın. Bir elinizde (baskın olmayan) Dumont #7 kavisli mikro forseps kullanarak, tunika albuginea'yı ve üstteki kasın geri kalanını yerleştirme noktasına uzak tutarak tunika albuginea'yı gergin tutun. Diğer baskın elinizle iğneyi düz mikro forsepsli olarak tutun ve kavernöz cismin seyrine paralel olarak sokun (Şekil 8).
- İğneyi kavernöz gövdeye 5-8 mm itin. Boruyu yıkayın ve hattı test etmek için kruvazöre bastırın (Şekil 9). Sızıntı olmadığından emin olun. Hattın yanlışlıkla çekilmesini önlemek için boruyu masaya bantla sabitleyin. Ekartörleri çıkarın.
7. CN'nin uyarılması
- Kayıt programını çalıştırırken (örn. Spike 2), intrakavernöz ve ortalama arter basıncını sürekli olarak kaydedin.
- CN stimülasyonu için bir stimülatör üzerinde aşağıdaki parametreleri ayarlayın (örneğin, SD9 Çim Aletleri, Malzeme Tablosuna bakın): 1.5 mA'da akım, 16 Hz'de frekans, 3 V'ta voltaj ve 5 ms'de darbe genişliği. Stimülasyonlar arasında en az 1 dakika dinlenerek 50 s stimülasyon uygulayın.
not: İlk stimülasyonlar genellikle yanıtın azalmasına neden olur (Şekil 10).
