Bir fare modelinde teta salınımlarının seçici manipülasyonu

Özet

Kaynak: Bender, F. et al., Davranan Farelerde Hipokampal Teta Salınımlarının Optogenetik Sürüklenmesi. J. Vis. Exp (2018)

Bu video, GABAerjik medial septum nöronlarında ışığa duyarlı iyon kanallarına sahip genetik olarak tasarlanmış bir fare modelinde teta salınımlarını modüle etmek için bir protokolü göstermektedir. Protokol, hipokampusa ışık darbeleri ileterek, nöronal aktiviteyi senkronize etmeyi ve yerel alan potansiyelleri olarak kaydedilen teta salınımları üretmeyi amaçlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

PV-Cre 10-25 haftalık knock-in erkek fareler kullanıldı. Fareler, hayvan tesisinde standart koşullar altında barındırıldı ve 12 aydınlık / karanlık döngüsünde tutuldu.

1. LFP Kayıtları için Tungsten Tel Dizilerinin Hazırlanması

1. Bir optik fiberi tel dizisine yapıştırın, böylece fiberin ucu en kısa tel seviyesinde olur ve fiber ucu yakın olur, ancak tungsten tellerine dokunmazsınız. İmplantasyon sırasında doku hasarını önlemek için lifin açısını mümkün olduğunca küçük tutun.

2. Optogenetik Stimülasyon ve Elektrofizyolojik Veri Toplama

1. Yama kablosundan gelen ışık çıkışını kontrol edin. İmplante edilen fiberin iletim hızına bağlı olarak bağlantıdan sonra fiber ucundan gelen ışık çıkışını tahmin edin. Güvenilir sürüklenme sağlamak için fiber uçtan gelen ışık çıkışının 5-15 mW arasında olduğundan emin olun.
2. Headstage önünü bağlayınampkronik olarak implante edilmiş konektöre. Optogenetik stimülasyon deneyleri için fiber optik yama kablosunu kronik olarak implante edilmiş hipokampal fibere bağlayın. Kontrol ışığı stimülasyon deneylerinde, optik fiber, kulaklığa bağlı sahte bir yüksüğe bağlanır.
3. Fareyi kayıt odasına yerleştirin.
4. Stimülasyon protokolünü oluşturmak için uyaran üretecini kontrol etmek için yazılımı açın.
5. 473 nm DPSS lazeri kontrol eden kanalı seçin.
6. Kayıt sisteminin yazılımını açın. Almak için "ACQ" ya ve kaydetmek için "REC" üzerine tıklayın. Temel davranışı kaydetmek için ışık stimülasyonunun başlatılmasını bekleyin (örneğin, temel hızı almak için 2 dakika veya taban çizgisi yerleştirme alanlarını çıkarmak için 30 dakika).
7. Uyaran üretecini kontrol etmek için yazılımı açın. "Dosya > Aç"a tıklayın ve tercih ettiğiniz protokol dosyasını seçin. Işık stimülasyonunu başlatmak için "İndir ve Başlat"a tıklayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
PV-Cre fareler	Jackson Laboratuvarı	B6; 129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J
473 nm DPSS lazer	Laserglow Teknolojileri, Toronto, ON, Kanada	R471005FX	LRS-0473 Serisi
593 nm DPSS lazer	Laserglow Teknolojileri	R591005FX	LRS-0594 Serisi
MC_Stimulus II	Çok Kanallı Sistemler, Reutlingen, Almanya	STG 4004
Tungsten teller	Kaliforniya İnce Tel Şirketi, Grover Beach, CA, ABD	CFW0010954	40 μm, %99,95
Sahne Başı	Neuralynx, Bozeman, Montana ABD	HS-8	Minyatür Headstage Unity Kazanç Ön Amplifikatörleri
Led	Nevralak	HS-LED-Kırmızı-omni-10V
MATLAB (MATEMAT)	Matematik İşleri, Natick, Yüksek Lisans, Amerika Birleşik Devletleri
MC_Stimulus yazılımı	Çok Kanallı, Sistemler
Çok modlu fiber optik	ThorLabs, Dachau, Almanya	FG105LCA	0.22 NA, Düşük OH, Ø105 μm Çekirdek, 400 - 2400 nm
Çok modlu fiber optik bağlayıcı	Thorlab'lar	FCMM50-50A-FC	1x2 MM Bağlantı Elemanı, 50:50 Bölme Oranı, 50 μm GI Fiberler, FC/PC

Tezli Yüksek Lisans Serisi Serisi