Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fare Hipokampal Dilimlerinde Uyarıcı Postsinaptik Akımların MikroRNA Aracılı İnhibisyonu

830 görüntülenme

⸱

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Thalhammer, A., et al. Bozulmamış Nöronal Devrelerde Gen Yıkımının Presinaptik Fonksiyon Üzerindeki Etkilerini Karakterize Etmek için Optogenetiği Yapay mikroRNA'larla Birleştirme. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, fare hipokampal beyin dilimlerinde uyarıcı sinaptik akımların mikroRNA aracılı inhibisyonunu göstermektedir. CA3 nöronları, bir floresan raportörü eksprese etmek için bir yapıyı, ışıkla aktive olan bir membran kanalını ve voltaj kapılı kalsiyum kanallarının ekspresyonunu aşağı regüle eden bir mikroRNA'yı barındıran rekombinant bir viral vektör ile enfekte edildi. Bir kayıt odasına bir dilim yerleştirildikten ve bir CA1 nöronunu bir kayıt pipeti ile yamaladıktan sonra, ışıkla aktive olan kanalı uyarmak için ışık darbeleri kullanıldı, bu da bir iyon akışı ile sonuçlandı ve bir aksiyon potansiyeli oluşturdu. CA3 nöronlarında voltaj kapılı kalsiyum kanallarının olmaması, nörotransmitter salınımını inhibe eder ve sinaptik olarak bağlı CA1 nöronlarında uyarıcı postsinaptik akımların inhibisyonuna neden olur.

Protokol

1. Optogenetik ile Devrilmiş Nöronların Hedefli Stimülasyonu ile Sağlam Nöronal Devrelerde Presinaptik Proteinlerin Rolünün Değerlendirilmesi

>NOT: Aşağıdaki protokol, akut beyin dilimlerinde elektrofizyolojik kayıtlarla ilgili önceden deneyim ve elektrofizyolojik bir kuruluma erişim gerektirir.

  1. Stereotaktik olarak mozaik serotip 1 ve 2 (rAAV1/2) ile rekombinant adeno ilişkili virüsü beyne enjekte edin. Fare veya sıçan beyni için stereotaktik atlasları kullanarak ilgilenilen beyin bölgesi için stereotaktik koordinatları belirleyin.
    1. Ø 7–9 μm uzunluğunda sapları olan enjeksiyon mikropip....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1. Optogenetik ile devrilmiş nöronların hedefli stimülasyonu ile doğal hipokampusta Cav2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb] rolünün değerlendirilmesi. (A) İn vivo enfeksiyon için kullanılan rAAV yapılarının ifade kasetinin şeması. (B) TdTomato floresansının CA3 bölgesi ve projeksiyonları ile sınırlı olduğunu gösteren hipokampal bölüm.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Beyin dilimleri Ön OdaHarvard AygıtıBSC-PC
CCD kamera tabanlı görüntüleyiciBiyo-RadChemiDoc™ Milletvekili
Hücre Kültürü reaktifleriYaşam Teknolojileri
alıştırmaÖnlükK.1030
EGTA (EGTA)SigmaE4378
Gentamisin merhemYerel eczane
glikozSigmaG7021
HEPES ÜNİVERSİTESİSigma54459
Enjeksiyon mikropipetleriNarishige (Narishig)GD1
İnorganik tuzlar ve deterjanlarSigma
K2-kreatin fosfatCalbiochem (Kireç Biyokimyası237911
KGluconateFluka Çiçeği60245
lazerLaserglow TeknolojileriLRS-0473-GFM-00100-03
zarAmershamProtran™ 0.2 μm NC
MgATP (MgATP)SigmaA9187
Mikropipet tutucuNarishige (Narishig)IM-H1
Mikropipet çektirmeNarishige (Narishig)PC-100
Na3GTPSigmaG8877
NaPiruvatSigmaP5280 Serisi
Oküler kayganlaştırıcıYerel eczaneGözyaşı
Povidon iyotYerel eczaneBetadin
Stereotaktik aparatTEFE
TetrodotoksinTocris (Türkçe)1069zehirli
VibratomLeica BelediyesiVT1200S
Lisansı Serisi Serisi Serisi ) Serisi Serisi Serisi Serisi

Daha fazla makale keşfet

MikroRNA İnhibisyonuOptogenetik StimülasyonViral Vektör EkspresyonuVoltaj Kapılı Kalsiyum KanallarıYama Kenetleme KaydıIşıkla Aktive Olan KanallarBeyin Dilimi HazırlamaSinaptik Akım Ölçümü