$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Bütünleştirici Mikro Sürücü Dizisinin Hazırlanması
- Başka bir yerde açıklandığı gibi kortikal yerel alan potansiyeli (LFP) kayıtları için bir mikro sürücü dizisi oluşturun. 6'de açıklandığı gibi biyofleks tellere bağlı elektrokardiyografi/elektromiyografi/solunum hızı (EKG/EMG/BR) kanalları olarak kullanmak için bir elektrot arayüz kartı (EIB) üzerinde en az 1.2 metal delik açık bırakın.
- Bir bioflex teli 5,0 cm uzunluğunda 6 parçaya kesin. ~5.0 mm uzunluğundaki tüm tel parçalarının her iki ucunun politetrafloroetilen (PTFE) kaplamasını soyun. Kablo parçalarının her birinin bir ucunu altın bir pim ile EIB üzerindeki açık metal deliklerden birine (EKG/EMG/BR kanalları) bağlayın.
- Bir emaye teli 5.0 cm'lik iki parçaya kesin. Bu tellerin her birinin bir ucunu EIB üzerindeki toprak/referans (g/r) kanallarına lehimleyin (Şekil 1).
- EKG elektrotlarının hazırlanması için, bir bioflex teli 16 cm'lik iki parçaya kesin. Bu tel parçalarının uçlarının PTFE kaplamasını bir uçta ~5.0 mm (kısa uç) ve diğer uçta ~15 mm (uzun uç) uzunluklarda soyun.
- Telin uzun ucunu bükerek ve halkanın şeklini lehimleyerek sabitleyerek 2.0 mm çapında bir tel halka oluşturun.
- EMG elektrotlarının hazırlanması için, bir bioflex teli 8 cm uzunluğunda 2 parçaya kesin. ~5.0 mm uzunluğundaki bu tel parçalarının her iki ucundan PTFE kaplamayı soyun.
- BR elektrotlarının hazırlanması için, bir bioflex teli 6.0 cm uzunluğunda 2 parçaya kesin. ~5.0 mm uzunluğundaki bu tel parçalarının her iki ucunun emaye kaplamasını soyun. Bu tel parçalarının her birinin bir ucunu paslanmaz çelik bir vidanın başına lehimleyin (gövde çapı: 1.0 mm, gövde uzunluğu: 4,0 mm).
- Toprak/referans (gr) elektrotların hazırlanması için, bir emaye teli 6,0 cm uzunluğunda 2 parçaya kesin. ~5.0 mm uzunluğundaki bu tel parçalarının her iki ucunun emaye kaplamasını soyun. Bu tel parçalarının her birinin bir ucunu paslanmaz çelik bir vidanın başına lehimleyin (gövde çapı: 1,4 mm, gövde uzunluğu: 3,0 mm).
- Gaz, tüm elektrotları ve paslanmaz vidaları sterilize eder ve bunları temiz bir alanda tutar.
2. Bütünleştirici Mikro Sürücü Dizisinin ve BR Elektrotlarının İmplantasyonu
- Fareyi stereotaksik bir cihaza sabitleyin. Gözler arasındaki noktadan boyun bölgesine kadar orta hat boyunca baş üzerinde ~3.0 cm'lik bir kesi yapın. Kafatasını açığa çıkarın.
- Yüksek hızlı bir matkapla koku alma ampulünün 0.7-1.0 mm üzerinde, 11.0 mm ön ve bregmaya 1 mm bilateral çaplarda iki dairesel kraniotomi yapın. Vida saplarının uçları beyin yüzeyine yapışana kadar kafatasına iki BR elektrodu implante edin.
- Frontal korteksin 0.7-1.0 mm üzerinde, 2.7 mm anterior ve 2.7 mm bilateral olarak iki dairesel kraniotomi yapın. Vida sapının ucu beyin yüzeyine yapışana kadar kafatasına iki g / r elektrot implante edin.
- Büyük kraniotomiyi çevreleyen alanda 1.0 mm çapında altı ila sekiz delik açın. Kafatasına implant ankraj vidaları (gövde çapı: 1,4 mm, gövde uzunluğu: 3,0 mm).
- Hipokampusun üzerinde ~ 2.0 mm çapında, 3.8 mm posterior ve bregmaya 2.5 mm bilateral büyük dairesel bir kraniotomi yapın. Bütünleştirici mikro sürücü dizisini, sürücü dizisinin kanül ucu büyük kraniyotominin üzerinde olacak şekilde yerleştirin
- Kanül ucu ile beyin yüzeyi arasındaki boşluğu ~ 100 μL iki çözelti ile doldurun, yani %0.5 (kütlece) sodyum aljinat ve %10 (kütlece) kalsiyum klorür.
not: Bu işlem, iki çözelti kafatası üzerinde karıştırıldıktan sonra ~ 5 dakika içinde şeffaf bir jel oluşturur.
- Kanülü, BR elektrotlarını, g/r elektrotlarını ve ankraj vidalarını 0,5 cm kalınlığında diş çimentosu ile örtün. Bu adımda BR ve g/r elektrotlarının açık uçlarını çimento ile kapatmamaya dikkat edin.
- EKG, EMG, BR ve g/r elektrotlarının açık uçlarını daha önce EIB'ye bağlı olan ayrı kablo uçlarına lehimleyin (bkz. adım 1.2 ve 1.3).
- Bütünleştirici mikro sürücü dizisinin alt kısmını ve tüm elektrot tellerini diş çimentosu ile kaplayın. Tüm elektrot tellerinin tamamen kaplandığından emin olun, böylece sıçan implantasyondan sonra onları çizemez.
- Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazandıktan sonra, hayvanı şeffaf Pleksiglas ev kafesine geri koyun ve su ve yiyeceğe serbest erişim ile kendi başına tutun. Ameliyattan sonra hayvanı antibiyotiklerle (gentamisin) tedavi edin.
3. In Vivo Kayıtlar
NOT: Birim aktiviteler (30 kHz'de örneklenmiş ve bant geçiren filtrelenmiş (500 - 6 kHz)) dışında tüm sinyaller yükseltilir, 2 kHz'de örneklenir ve bant geçiren filtrelenir (0.1 - 500 Hz) bant geçiren filtrelenir (6 - 30 Hz).
- Bütünleştirici mikro sürücü dizisinin EIB'sini bir kayıt cihazının ana sahnesine bağlayın.
- Ameliyattan sonra birkaç hafta boyunca vidaları çevirerek tetrodları ilerletin. Tetrodlar hedef beyin bölgelerine bitişik hale geldikten sonra, stabil kayıtlar için tetrodları birkaç günlük bir süre boyunca alanlara yerleştirin.
- Hayvan bir kayıt odasında serbestçe hareket ederken elektrik sinyallerini izleyin.
