Bir Sıçan Yavrusunda İşitsel Beyin Sapı Tepkilerinin Kaydedilmesi

Özet

Kaynak: Chang, A. ve diğerleri, Doğum Sonrası Sıçanlarda İşitsel Beyin Sapı Tepkisi ve Dış Tüylü Hücre Tam Hücre Yama Kelepçesi Kaydı. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, sıçan yavrularından işitsel beyin sapı tepkilerini (ABR'ler) kaydetmek için bir yöntem göstermektedir. Nöral tepkileri değerlendirmek için beyin sapında elektrot yerleştirme, ses uyaran uygulaması ve sinyal işleme analizi adımlarını ana hatlarıyla belirtir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. İşitsel Beyin Sapı Yanıtı (ABR) Kaydı

1. Sprague Dawley (SD) sıçanlarını (1-14 günlük yavrular ve 2 aylık yetişkinler, her iki cinsiyet) tek bir % 1.5 sodyum pentobarbital (yavrular için 22 mg / kg ve yetişkinler için 30 mg / kg, intraperitoneal (i.p.) enjeksiyonu ile anestezizleştirin.
2. Hayvanın vücudunu hareketsiz hale getirmek için anestezi uygulanmış hayvanı polietilen köpük bir kalıba yerleştirin. Hayvanı ses azaltıcı bir odada titreşim önleyici bir masaya yerleştirin. Bir ısıtma yastığı ile hayvanın vücut ısısını 37,5 °C'de tutun.
3. Baş bölgesini %70 (hacim/hacim) etanol ile silin. İnce bir makas kullanarak, referans elektrodu veya toprağı yerleştirmek için dış kulak kepçesine 1-2 mm'lik bir insizyon ventrolateral yapın. Kafatası tepe noktası üzerinde bir subdermal iğne elektrodu (kayıt elektrodu) bulunur (Şekil 1A).
4. Fonksiyon üretecini kullanarak, çeşitli frekanslarda (2, 4, 8, 16, 24 ve 32 kHz) ve yoğunluklarda (5 dB'lik adımda 85'ten 10 dB SPL'ye düşürüldü) kalibre edilmiş ton patlamaları (1 ms yükselme/düşme, 3 ms plato) oluşturun. Frekansı ve genliği manuel olarak veya bir bilgisayar kullanarak değiştirin. Hayvanın kafasına doğru 10 cm uzaklıkta bulunan elektrostatik bir hoparlör aracılığıyla ses uyaranları iletin.
5. ABR'leri elde etmek için çok işlevli bir işlemci kullanarak sesi filtreleyin (100-1.000 Hz), yükseltin ve ortalama (256 kez) ortaya çıkan potansiyeli elde edin. ABR izleri çevrimiçi olarak izlenir ve çevrimdışı analiz için saklanır. Bir hayvandan ABR kaydının tamamlanması yaklaşık 40 dakika sürer.
   not: Genellikle, 15 ms'den daha az gecikmelere sahip üç ila yedi tepe noktası (dalga I ila dalga VII) tanımlanabilir (Şekil 1B). ABR eşiği, I. ve II. dalgaların tespit edilebileceği minimum ses seviyesi olarak tanımlanır.
6. Hayvanlar anesteziden uyanmadan önce ötenazi yapın (0.3 mL% 1.5 sodyum pentobarbital intraperitoneal enjeksiyon ile).

Sonuçlar

Şekil 1. İşitsel beyin sapı yanıt kaydı. (A) Kayıt elektrodu, iki kulak arasındaki kafa derisine yerleştirildi. Toprak ve referans elektrotları sırasıyla sol ve sağ kulak kepçesinin altına yerleştirildi. Sıçanın burun ucundan 10 cm uzağa açık alan hoparlörü yerleştirildi. (B) 16 kHz, 80 dB SPL ton patlamalarına yanıt olarak iki temsili ABR dalga formu. Bir P8 yavrusun...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Pentobarbital sodyum	Sigma	P3761 Serisi	Suda% 1.5
SD sıçan	Güney Tıp Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi
ES1 hoparlör	Tucker-Davis Teknolojileri
TDT sistemi 3	Tucker-Davis Teknolojileri
SigGenRP yazılımı	Tucker-Davis Teknolojileri
BioSigRP yazılımı	Tucker-Davis Teknolojileri
jKelepçe	Bilimsel Çözümler
Düşük Gürültülü Veri Toplama Sistemi	akson	1440Bir