Cerrahi Olarak İnterve Edilmiş Bir Fare Modelinde Duyusal Sinir Fonksiyonunun Test Edilmesi

Abstract

Kaynak: Peterson, S. C. ve ark., Kutanöz Cerrahi Denervasyon: Deri Hastalığının Fare Modellerinde Sinir Gereksinimini Test Etmek İçin Bir Yöntem. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, bir fare modelinde duyusal sinir fonksiyonunun bir tarafı cerrahi olarak denerve ederek ve diğer tarafı kontrol olarak bırakarak test edilmesini gösterir. Mekanik stimülasyona verilen yanıt, duyusal sinirlerin rolünü doğrular.

Protocol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi Denervasyon

1. Anestezik solüsyonu 20 g fare vücut ağırlığı başına 200 μl'lik bir dozda intraperitoneal olarak enjekte edin. Ayak parmağı tutam testi ile hayvanın uygun sedasyon düzlemine ulaştığını kontrol edin ve kalp ve solunum hızlarının normal olduğunu onaylayın (sırasıyla dakikada yaklaşık 600 atım ve 160 nefes).
2. Betadine ve alkollü mendiller kullanarak sırt derisinin cerrahi bölgesini hazırlayın ve hayvanı steril bir cerrahi örtü ile örtün (gösteri amacıyla, görünürlüğü artırmak için steril örtü çıkarılmıştır). Aseptik bir cerrahi alanda çalışırken bir ısıtma yastığı kullanarak hayvanı sıcak tutun.
3. Boynun tabanından kuyruğun yaklaşık 0,5 cm yukarısına kadar dorsal orta hat boyunca steril bir #11 neşter kullanarak bir kesi yapın.
4. Künt forseps kullanarak, boynun yakınındaki skapular yağ yastıkçıklarından arka bacağın hemen üstüne kadar altta yatan dokuyu görselleştirmek için sol taraftaki cildi yan taraftan nazikçe yansıtın.
   not: Dorsal kutanöz sinirler, keskin kıvrımlar yapmadan ve cilt altındaki gevşek bağ dokusuna girmeden önce gövde duvarının yarı saydam fasyasından kaudal olarak geçen beyaz iplikler olarak görünür (Şekil 1).
5. Diseksiyon ışık mikroskobu altında ultra ince forseps kullanarak, T3-12 anatomik bölgelerinde bulunan hayvanın sadece sol tarafından sinirleri, segmentlerin gövde duvarında büküldüğü yerden deriye giriş bölgelerine kadar kopararak çıkarın (Şekil 1).
   1. Forsepsleri dikey olarak yönlendirir ve bükülme yerlerinin yaklaşık 0,5 cm altından kavrayarak ve yukarı doğru çekerek sinirleri uzaklaştırır, bu da sinirin gerilmesine ve çevre dokudan ayrılmasına neden olur (Şekil 1C-E). Bitişik kan damarlarının yırtılmasını önlemek için dikkatli olun.
   2. Gövde duvarından cilde uzanan tüm sinirler çıkarılana kadar devam edin. Gövde duvarının yoğun fasyasındaki sinirleri bozmayın. Periyodik olarak steril% 0.9 tuzlu su çözeltisi damlaları uygulayarak dokuyu prosedür boyunca nemli tutun.
   3. Alternatif olarak, proksimal uçlarını gövde duvarının yakınında forseps ile kavrayarak ve ince makasla keserek sinirleri çıkarın. Daha sonra, cilde yakın distal uçları kesin (Şekil 1F-H). Son olarak, araya giren sinir segmentlerini çıkarın (Şekil 1I).
6. Adım 1.4'te açıkta kalan deri flebindeki tüm sinirleri çıkarın. Bu lifler dorsal kutanöz sinirlerin distal dallarını içerir ve deri flebinin dermal tarafındaki bağ dokusu içinde sporadik olarak yerleşmiş beyaz dallanan iplikler olarak görülür (Şekil 1J-K).
   1. Bu ince dalları çıkarmak için, ince forsepsleri dermal yüzeye kabaca paralel olarak konumlandırın, sinirleri kavrayın ve kan damarlarını bozmamak ve cildi delmemek için yukarı doğru koparın. Görünür tüm sinirler çıkarılana kadar devam edin.
7. Künt diseksiyon kullanarak, dorsal orta hat insizyonunun sağ tarafındaki cildi yansıtın, ancak sinirleri çıkarmayın. Bu, kontralateral sahte kumandalı kontrol görevi görecektir.
8. 6-0 naylon sütür kullanarak insizyonu kapatmak için dorsal orta hat boyunca basit bir kesintili düzende, kabaca 3 mm aralıklarla basit bir kesintili düzende süpürün.
9. Ameliyat geçirmiş fareleri, tamamen iyileşene kadar diğer hayvanlarla aynı kafese geri koymayın.
10. Hayvanları ameliyattan hemen sonra bilinçleri geri gelene kadar ve ayrıca cerrahi alan iyileşene kadar günlük olarak, tipik olarak 1 hafta içinde izleyin. Belirlenmiş kurumsal hayvan bakımına uygun olarak analjezikler kullanın ve fareler ağrı veya sıkıntı belirtileri gösteriyorsa yönergeleri kullanın. Ameliyattan sonraki 7-10 gün içinde dikişleri alın. not: Gerekirse, carprofen (50 mg / ml stok çözeltisi) 1:100 steril suda seyrelterek analjezik çözelti hazırlayın. Solüsyonu, 20 g vücut ağırlığı başına 200 μl'lik bir dozda (5 mg / kg fare vücut ağırlığı) boynun tırnağına yakın omuz bıçakları arasına deri altından enjekte edin.
11. Ameliyattan birkaç hafta sonrasına kadar stabil denervasyonu fonksiyonel olarak değerlendirmek için, elektrikli bir kesme makinesi kullanarak sırt derisindeki tüyleri çıkarın.
12. Hipodermik bir iğne kullanarak denerve edilmiş cilt bölgesini nazikçe delin ve hayvanın tipik olarak titreyerek veya başını çevirerek yanıt verip vermediğini not edin. Deri bölgesi stabil bir şekilde denerve edilmişse, hayvan çok az tepki gösterecek veya hiç tepki göstermeyecektir.

Results

Şekil 1. Dorsal cildi denerve etmek için iki yaklaşım. (A) İnnerve edilmiş fare derisinin karikatür diyagramı. Kırmızı noktalı çizgiler, gövde duvarındaki altta yatan kas sistemini (mor) ve yansıyan derinin altındaki dermisi (gri, yıldız) ortaya çıkarmak için dorsal orta hat boyunca yapılan tek bir eksizyonu gösterir. Kaudal olarak hareket eden dorsal kutanöz sinirler, gövde duvarından ayrılırken "...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alkol hazırlama pedleri	Pdı	B339
AnaSed (Ksilazin)	Lloyd	NADA 139-236
Betadine hazırlık pedleri	Medline (Medline)	MDS093917
Carprofen (Rimadyl)	Zoetis Belediyesi
Akülü şarj edilebilir saç kesme makinesi	Ayhan	Giyotin modeli 8900
6-0 naylon sütürler	DemeTECH (Teknoloji)	NL166012F4P
Ultra ince forseps	Dumont	0103-5-PO