Drosophila'da Duyusal Nöronlardan Gelen Fizyolojik Tepkilerin Saptanması

Özet

Kaynak: Shankar, S., et al. Drosophila Duyusal Nöronlarının Lipid Feromonlara Fizyolojik Tepkilerinin Canlı Kalsiyum Görüntüleme Kullanılarak Ölçülmesi. J. Vis. Uzm. (2016).

Bu video, ligand bağlanması ve floresan görüntüleme kullanarak Drosophila'da duyusal nöron tepkilerini tespit etmek için bir yöntemi göstermektedir. Ligandlar nöron reseptörlerine bağlanarak kalsiyum akışına neden olur. Kalsiyum, gösterge komplekslerine bağlanarak floresan emisyonuna yol açar ve bu da ligandın nöronal tepkisini doğrular.

Protokol

1. Numune Hazırlama

1. Gal4 sürücü hattını UAS-GCaMP5G'ye geçin Drosophila melanogaster sinekleri (w; P{20XUAS-IVS-GCaMP5G}attP40). Çaprazın 25 °C.
   'de büyümesine izin verin not: Gal4 veya UAS-GCaMP transgenlerinin birden fazla kopyası ile sinekler üretmek, floresan sinyal yoğunluğunu artırmaya yardımcı olabilir. UAS-GCaMP transgeninin (UAS-GCaMP3) daha önceki bir versiyonu, Gr68a-Gal4 sürücüsünün kontrolü altında ifade edildiğinde çok zayıf floresan yoğunluğu gösterdi.
   1. Yeni kapatılmış yetişkin sinekleri toplayın ve cinsiyete göre ayırın....

Sonuçlar

Resim 1: Ön bacak veya hortum nöronlarının görüntülenmesi için canlı bir sineğin montajı. (A) Ön bacağın montajı: Canlı bir erkek sineğin 3.2X görüntüsü, ön ayakların lamel bantla tutturulduğunu gösterir. (B) Sineğin 40X görüntüsü, tarsal segmentlerin her birini (T1-5) ve bandın birinci tarsal segmentin üzerine ve beşinci tarsal segmente yerleştirilmesini gösterir. (C) Hortumun montajı: Hortumun ucunu.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Gr68A-Gal4			H. Amrein (Texas A&M Sağlık Bilimleri Merkezi, Teksas, ABD) ve J. Carlson'dan (Yale Üniversitesi, CT, ABD) hediye
ppk23-Gal4			K. Scott'tan Hediye (Kaliforniya Üniversitesi, Berkeley, CA, ABD)
UAS-GCaMP5		42037	Bloomington Drosophila Stok Merkezi
0,17 mm lamel (Gold-Seal lamel )	Elektron Mikroskobu Hizmetleri	63790-10
Oje, "Çivi Kadar Sert Berrak"	Sally Hansen ·
PAP kalemi	Sigma-Aldrich	Z377821
Boya fırçası			İnce uçlu fırça
Teyp	İskoç markası
Triton X-100	Sigma-Aldrich	13021
Etanol, laboratuvar sınıfı	Merck	10094
Hekzan, HPLC sınıfı	Sigma-Aldrich	H303SK-4
DMSO (Türkçe)	Sigma-Aldrich	472301
PBST (Yüksek Lisans)			Protokol bölümünde açıklanan tarif
CH503			Mori ve ark., 2010'da açıklanan sentez
sCMOS Kamera (ORCA Flash4.0)	Hamamatsu	C11578-22U
Mikroskop (Ti-Tutulma)	Nikon	Ni-E
Dönen Disk Tarama kafası	Yokogawa Belediyesi	CSU-X1-A1

Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Serisi