$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hayvanın hazırlanması:
- Sıçatanı, etkiye veda etmek için% 1-2 oranında bir inhalan (izofluran) kullanarak veya enjeksiyonla (ketamin, ksilazin, asepromazin) anestezik hale getirin. Enjekte edilebilir anestezi dozu aşağıdaki gibidir: 95.0 mg / kg ketamin, 10.0 mg / kg ksilazin, 0.075 mg / kg asepromazin.
not: Bu CMAP kayıt protokolünü yürütürken hem inhalan hem de enjekte edilebilir anestezik yaklaşımları tercih etmeden başarıyla kullanıyoruz.
- Hayvan, ameliyata başlamadan önce, ameliyatın sonuçlanmasına kadar ve ameliyat sonrası buprenorfin etkisini gösterene kadar uygun anestezik derinlikte tutulmalıdır. Bir geri çekilme yanıtının ortaya çıkmadığını belirlemek için kısa ayak parmağını çimdikleyerek uygun anesteziyi onaylayın. Ek olarak, kornea refleksini pamuklu çubukla test edin. Cerrahi prosedür boyunca, kalp atış hızının ve solunum hızının artmadığını belirleyin, bu da anestezik derinliğin çok hafif hale geldiğini gösterir.
- Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için hayvanın gözlerine veteriner merhemi sürün.
- Cerrah ameliyata başlamadan önce ellerini bir dezenfektan (klorheksidin ovma) ile yıkamalıdır. Cerrah steril eldiven, yüz maskesi ve önlük veya temiz laboratuvar önlüğü giymelidir. Ameliyattan önce tüm aletler yıkanmalı ve otoklavlanmalıdır. Sterilizasyonun tamamlandığını doğrulamak için aletlerin seviyesinde otoklavlamadan önce alet kitinin içine bir sterilizasyon gösterge şeridi ekleyin. Cerrah, ameliyata başlamadan önce şerit üzerindeki tüm çizginin siyah olduğunu doğrulamalıdır. Kutunun dışını da gösterge otoklav bandı ile bantlayın. Aynı gün birkaç hayvana ameliyat yapılacaksa, ameliyatlar arasında aletleri temizleyin ve bir cam boncuk sterilizatöründe sterilize edin. Gerekirse, aletin sapını uygun süre sterilizatöre yerleştirerek, aleti steril bir hemostat ile çıkararak, steril bir alanda soğutarak ve ardından aletin işlevsel ucunu uygun süre boyunca cam boncuk sterilizatörüne yerleştirerek aletin her iki ucunu da cam boncuk sterilizatöründe sterilize edin.
- Hayvan uyuşturulduktan sonra, sırt yüzeyi aşağı ve karın yukarı bakacak şekilde cerrahi tahtaya yerleştirin, böylece hayvanın ön ayaklarını cerrahi tahtaya sabitlemek için bant kullanılabilir.
- Kafatasının tabanından başlayarak ventral yüzeyi kaudal olarak tıraş edin ve hangi hemi-diyaframın kaydedildiğine bağlı olarak orta hattın her iki tarafındaki karın çevresindeki alanın tıraş edildiğinden emin olun. Cildin traşlı yüzeyine povidon-iyot uygulayın.
2. CMAP kayıtları için hazırlık:
- Hayvan hazırlığını takiben, toprak elektrodunu deri altından kuyruğa yerleştirin (Şekil 1).
- Referans elektrodu deri altından karşı alt karın bölgesine yerleştirin.
- İletken jeli kendinden yapışkanlı yüzey şeridine veya disk kayıt elektroduna yerleştirin (yüzey şeridi elektrodunun boyutları: 0,5 x 3 cm) ve ardından yüzey elektrodunu tek taraflı kostal kenar boşluğu boyunca enine yerleştirin.
- Uyarıcı elektrotları transkutan, 0,5 cm aralıklarla, trakeanın lateralinde ve klavikulanın üstünde yerleştirin. Elektrotları cildin yaklaşık 1.0 cm derinliğine yerleştirin. Elektrotları, sonraki stimülasyonlarla konumları hareket etmeyecek şekilde elle sabitleyin.
not: Açı uyarıcı elektrotlar, yerleştirildiği yerde cilde göre 90°.
>3. Bileşik Kas Aksiyon Potansiyeli (CMAP) kayıtları:
- Bir stimülatör / amplifikatör kullanarak elektrofizyolojik kayıtlar elde edin ve ardından bilgisayar destekli veri analizi yapın.
- Tek çekme stimülasyonunun uyaran parametreleri 0.5 milin, 1.0 Hz supramaksimal darbeler olmalıdır. Uyaranın genliği 6.0 ile 8.0 V arasında olmalıdır (Şekil 2A).
not: Bir deneyde, hayvanlar arasında aynı genliğe sahip bir uyaran yoğunluğu kullanın. Amaç, minimum stimülasyon genliğini kullanarak yanıt genliğini en üst düzeye çıkarmaktır. Stimülasyon anında ortaya çıkan ilk tepkinin bir stimülasyon artefaktı olduğuna dikkat etmek önemlidir. Ek olarak, stimülasyon artefaktından sonra stabil / düz bir taban çizgisinden önce gelen ve ardından hızlı CMAP yanıtı gelen bir CMAP yanıtı elde etmek için özen gösterilmelidir. Böyle bir yanıt elde etmek için, stimülasyon ve/veya kayıt elektrotlarını yeniden konumlandırmak gerekebilir.
- Stimülasyonlar arasında 30 saniye bekleyin ve ortalama yanıtı elde etmek için arka arkaya 10 stimülasyonu tekrarlayın (Şekil 2B-C). Taban çizgisinden zirveye kadar genliği ölçün (Şekil 2A). Frenik sinir/diyafram aktive edilmediğinde hayvanın solunum döngüsü aşamasında frenik sinir stimülasyonu yapın. İşlem, kontralateral hemi-diyafram için aynı hayvan üzerinde tekrarlanabilir.
- Son CMAP kayıt seansından sonra, diyafram nöromüsküler kavşak (NMJ) boyaması yapılacaksa hayvana perfüze edin. CMAP kayıtlarını aynı hayvan üzerinde yaklaşık olarak haftada bir kez (veya tercih edilen aralıklarla) tekrar tekrar yapın.
- Hayatta kalma CMAP kayıtlarını takiben, hayvanın dolaşımdaki bir ılık su ısıtma yastığı üzerinde iyileşmesine izin verin ve iyileşme sırasında uyanık ve sternal olarak yaslanana kadar sürekli olarak izleyin. Ameliyat geçirmiş bir hayvanı, tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirketine iade etmeyin.
- Sternal olarak yaslandıktan sonra, hayvanı ilk 48 saat boyunca her 12 saatte bir izleyin (daha sonra günde bir kez). Hayvan susuz kalmış gibi görünüyorsa (sarkık deri, halsizlik), ameliyat sonrası kilo ve sıvı kaybı stabilize olana kadar sıvıları (laktasyonlu halkalar çözeltisi; deri altında; enjeksiyon başına 1-2 ml, bölgeler döndürülerek; günde 2 kez) uygulayın. Hayvanlara, tel çubuk kapaklı besleyiciye ulaşamazlarsa yemeyi teşvik etmek için, gerekirse ameliyat sonrası akut dönemde küçük tabaklarda yumuşatılmış yiyecekler sağlayın.
- Ameliyatın bitiminden önce 0.05 mg / kg'lık bir dozda ve daha sonra ilk 24 saat boyunca 12 saat aralıklarla (ve daha sonra ağrı / stres belirtilerine bağlı olarak) deri altı enjeksiyon yoluyla (bölge döndürülmüş) buprenorfin uygulayın. Daha sonra ağrı veya sıkıntı belirtileri fark edilirse, hayvanları buprenorfin ile tedavi edin. Ağrı/sıkıntıyı gösteren belirtiler arasında aktivite eksikliği, seslendirmeler, yeme veya içme eksikliği (dehidrasyon), aşırı kilo kaybı, koruma, kesi yerinde aşırı kemirme veya kaşıma yer alır. Ağrı ve sıkıntının belirlenmesinde kullanılan ek kriterler arasında yabancı uyaranlara yanıtsızlık, geçici veya sebepsiz seslendirme, zahmetli veya anormal solunum, kalıcı kırmızımsı-kahverengi nazo-okküler akıntı, belirgin piloereksiyon yer alır. Ayrıca, hasta hayvanları düşündürecek kötü hijyen kanıtlarını da izleyin. Hayvanın 72 saatlik tedaviden sonra hala sıkıntı içinde olduğu gözlemlenirse (yukarıda belirtilen ağrı / stres kriterlerine göre ve yukarıda açıklanan analjezik protokolü aldıktan sonra) hayvana ötenazi yapın.
<...