In vivo (İn canlı) Drosophila melanogaster'de Sinaptik Lokalize Kalsiyum Sensörleri Kullanılarak Kalsiyum Görüntüleme

Özet

Kaynak: Hancock, C. E. ve diğerleri, Drosophila melanogaster'de Öğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisitenin İn Vivo Optik Kalsiyum Görüntülemesi.J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, sineklerde sinaptik olarak lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak in vivo kalsiyum görüntüleme yöntemi gösterilmektedir. Sinekleri mikroskopi için hazırlamak, koku alma koşullandırması yapmak ve koku kaynaklı kalsiyum akışını görselleştirmek için adımları ana hatlarıyla belirtir.

Protokol

1. Transgenik meyve sinekleri, Drosophila melanogaster

1. Çapraz dişi bakire ve erkek sinekler (12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsünde% 60 bağıl nemde 25 ° C'de yükseltilir), istenen Gal4 ve UAS yapılarını taşır ve ilgilenilen belirli nöronların genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum göstergesini ifade ettiği sinekler üretir.
2. Yukarıdaki melezin dişi döllerini, eklosiyondan 3-6 gün sonra 3-6 gün aralığına gelene kadar yaşlandırın. Dişi sinekler biraz daha büyük olmaları nedeniyle tercih edilir.

2. Meyve sineğinin in vivo kalsiyum görüntüleme için hazırlanması

1. ....

Sonuçlar

Şekil 1: Bir montaj odasının inşası ve görüntüleme için bir sineğin hazırlanması.(a) Sinek montaj odasının inşası için adımlar. Taban, ince bir plastik ağ (2) ile kaplanmış standart bir mikroskop lamından (1) oluşur. Zıt yükler (3) taşıyan iki elektrik kablosu, her iki taraftaki kızağa yapıştırılmıştır. Teller, birbirine paralel uzanan ancak temas halinde olmayan sürgüyü (4) geçmek iç.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1-Okten-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	O5284	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
3-Oktanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	218405	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
4-Metilsikloheksanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	153095	Koku verici olarak kullanılan kimyasal
EGFP için bant geçiren filtre (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya
Şeffaf yapışkan bant	Tesa SE, Norderstedt, Almanya		Standart şeffaf yapışkan bant
İçbükey dışbükey çeneler	Güzel Bilim Araçları, Kuzey Vancouver, Kanada	10053-09	İçbükey dışbükey çeneli Bıçak Tutucular
İnce forseps	Güzel Bilim Araçları, Kuzey Vancouver, Kanada	11412-11	Uçlu forseps 0,1 x 0,06 mm
Hipodermik iğne	Sterican - B. Braun, Melsungenk, Almanya	4665120	1,20x40 mm
Böcek Minutien pimleri	Güzel Bilim Araçları, Kuzey Vancouver, Kanada	26002-10	Çap 0,1 mm, uç 0,0125 mm
Kentoflow (Kentoflow)	Kent Express Diş Malzemeleri, Gillingham, Birleşik Krallık	953683	Mavi ışıkla sertleşen yapıştırıcı
Mikroskop lamı	Carl Roth GmbH & Co. KG, Karlsruhe, Almanya	656.1	Standart objektif sürgüsü 76 x 26 mm
Mineral yağ	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	M8410	Koku vericiler için seyreltici olarak kullanılır
Mod kilitli Ti-Safir lazer Chameleon Vision 2	Tutarlı Inc., Santa Clara, CA, ABD		Ayarlanabilir kızılötesi femtosaniye lazer
BiG dedektörleri ile donatılmış Multifoton Mikroskobu LSM 7MP	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya		Çoklu foton mikroskobu, birden fazla şirket benzer cihazlar sağlar.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) suya daldırma objektifi	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Almanya	421452-9900-000	Objektif W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Ringer'ın çözümü	N.A.	N.A.	5mM KCl, 130mM NaCl, 2mM MgCl2, 2mM CaCl2, 5mM Hepes-NaOH, 36mM sükroz, pH = 7.4
Bıçak bıçağı	Sharpoint, Cerrahi Uzmanlıklar Şirketi, Okuma, PA, ABD	72-1551	5,0 mm Düz kısıtlı bıçak derinliği
Cerrahi neşter bıçağı	Swann-Morton, Sheffield, Birleşik Krallık	303	Ürün No. 11
Cerrahi neşter sapı	Swann-Morton, Sheffield, Birleşik Krallık	907	Ürün No. 7S/S
Koku verme cihazından bir tetikleyici almak için Visual Basics of Applicatons (VBA) yazılımı ve elektrik çarpması uygulama cihazından (güç kaynağı) mikroskobu kontrol eden Zeiss'ın ZEN yazılımı ile etkileşime girmek için.	Özel olarak yazılmış ve istek üzerine temin edilebilir	N.A.	N.A.

Serisi Serisi